Isolamento de células T baseado em flotação usando classificação de células ativada por flutuabilidade

Para isolar as células T - glóbulos brancos essenciais para o sistema imunológico - usando a classificação de células ativadas por flutuabilidade, BACS, tome uma suspensão de células mononucleares do sangue periférico, PBMCs. Os PBMCs contêm células T alvo e células não-alvo, como células B, monócitos, células assassinas naturais e células dendríticas.

Adicione um tampão contendo uma quantidade adequada de anticorpo anti-CD3 biotinilado e incube durante o tempo necessário. O anticorpo se liga ao complexo CD3 - um complexo de proteínas multiméricas na superfície celular - uma característica definidora das células T.

Adicione microbolhas funcionalizadas - pequenas partículas esféricas revestidas com estreptavidina - para seleção positiva de células T ligadas a anticorpos. O núcleo de cada microbolha é uma esfera oca, tornando-as partículas de baixa densidade capazes de flutuar em uma solução aquosa.

Incube a mistura sob agitação, permitindo que as microbolhas e a amostra se misturem completamente. Durante a incubação, a estreptavidina na microbolha liga-se à biotina no anticorpo ligado às células T, imobilizando as células nas microbolhas.

Centrifugue o tubo. As células não-alvo sepa