Detecção de aderência bacteriana às células hospedeiras usando imagens de fluorescência

Pegue uma placa de vários poços contendo monocamada de células epiteliais aderentes suscetíveis à aderência bacteriana.

Adicione números variados de Pseudomonas aeruginosa marcada com proteína fluorescente, uma bactéria patogênica, para atingir a proporção desejada de bactérias para células epiteliais.

Centrifugue para aproximar as bactérias das células epiteliais, facilitando as interações.

Os pili tipo IV, fibras proteicas da bactéria, desempenham um papel fundamental ao se ligarem a glicolipídios específicos nas células epiteliais, mediando a adesão bacteriana às células hospedeiras.

Pós-incubação, lave com um tampão para remover as bactérias não aderentes. Fixe as células para preservar a estrutura celular.

Adicione DAPI, uma coloração fluorescente que se liga fortemente às regiões de DNA ricas em A-T, corando o núcleo. Cubra as células com tampão para evitar o ressecamento das células.

Adquira imagens das bactérias marcadas com GFP ligadas a células epiteliais com núcleo corado com DAPI. Enumere as bactérias aderentes em uma única célula epitelial.

O aumento de bactérias aderentes por célula hospedeira de maneira dose-dependente permite a quantificação das interações patógeno-