Avaliando a eficácia de um composto de teste antiviral por meio de um ensaio de inativação viral
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:41 min. • July 8th, 2025
Pegue tubos com um vírus da hepatite C recombinante ou suspensão de HCV contendo RNA que codifica um repórter de luciferase secretado.
Adicione um composto de teste antiviral e solvente aos tubos de teste e controle negativo.
Os compostos de teste se ligam às glicoproteínas do HCV, inativando o vírus.
Após a incubação, dilua as misturas para evitar interações composto-célula nas etapas subsequentes.
Adicione essas misturas diluídas em monocamadas de hepatoma que suportam a replicação do HCV. Incubar.
O HCV inativado pelo composto não pode se ligar a receptores específicos da superfície celular, enquanto as glicoproteínas ativas do HCV se ligam a esses receptores, facilitando a ligação celular.
Remova os HCVs não adsorvidos. Lave com tampão e adicione a mídia. Incubar por um período prolongado.
O HCV ligado é internalizado, liberando RNA viral e levando à síntese de proteína viral e luciferase, secretada pela célula.
Colete os sobrenadantes de cultura contendo luciferase. Centrifugue e adicione um substrato de luciferase aos sobrenadantes.
A luciferase oxida o substrato, emitindo luz.
Uma luminescência mais alta no poço de controle do que no teste indica inativação viral pelo compos
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos