Analisando a relação antigênica entre vírus usando um ensaio de microneutralização baseado em imagem

Adicione meios e anti-soros tratados com enzimas destruidoras de receptores diluídos em série em monocamadas de células de mamíferos, evitando a ligação inespecífica ao vírus.

Adicione uma suspensão do vírus influenza. Os anticorpos anti-soros, específicos para proteínas virais, ligam-se, neutralizando os vírus e impedindo a entrada celular.

A baixa concentração de anticorpos neutralizantes ou anticorpos não neutralizantes permitem a ligação ineficaz do antígeno viral, permitindo a ligação do vírus aos receptores celulares.

Descarte a mídia. Aplique meios contendo celulose, formando uma camada semi-sólida.

O vírus usa a maquinaria da célula hospedeira para formar partículas virais e causar lise celular.

A sobreposição restringe o movimento do vírus, facilitando a infecção localizada e criando buracos nas monocamadas celulares.

Remova a sobreposição. Fixe e permeabilize as células.

Lave com tampão. Adicione anticorpos que se ligam a antígenos virais dentro das células permeabilizadas.

Pipetar anticorpos secundários conjugados com peroxidase de rábano que se ligam a anticorpos primários.

Introduzir substratos de peroxidase e peróxido de hidrogênio, resultando em um produto azul.

Poço