Um modelo de interposição aórtica de camundongo para estudar a rejeição vascular induzida por aloimunidade

Prepare um camundongo doador anestesiado e coloque-o em decúbito dorsal. Faça uma incisão na linha média para expor a cavidade abdominal.

Externalize o intestino para localizar a aorta abdominal infrarrenal ou AIA abaixo das artérias renais, transportando sangue oxigenado.

Separe o IAA da veia cava inferior adjacente, que transporta sangue desoxigenado.

Ligue os pequenos ramos próximos ao IAA e prenda o IAA para obstruir o fluxo sanguíneo.

Ressecção um segmento de comprimento apropriado e coloque-o em solução salina.

Repita o procedimento com um camundongo receptor de origem genética diferente.

Implante o IAA do doador dentro do receptor, combinando sua orientação anatômica.

Realize anastomoses término-terminal suturando as extremidades do enxerto doador nas extremidades do receptor.

Solte o clamps e verifique o fluxo sanguíneo normal sem vazamento. Retorne o intestino para a cavidade abdominal. Em seguida, suture o local da incisão.

O modelo agora está pronto para estudar as respostas imunes contra o enxerto IAA transplantado.

Comece colocando o camundongo doador em decúbito dorsal em uma placa de acrílico fina e limpa envolta em uma cortina estéril sob o microscópio cirúrgico com uma ampliação de 8 a 30 vezes.

Depois de confirmar a anestesia cirúrgica adequada por pinça do dedo do pé, use uma tesoura estéril para fazer uma única incisão na linha média do púbis ao apêndice xifóide. Em seguida, use um pequeno afastador para abrir as paredes abdominais, expondo a cavidade abdominal. Em seguida, use aplicadores estéreis com ponta de algodão para retrair suavemente os intestinos superiormente à esquerda do animal. Cubra o tecido com gaze umedecida com solução salina e mova os órgãos reprodutivos inferiormente para localizar a aorta infrarrenal e a veia cava inferior ou VCI.

Agora, use uma pinça médica número 5 para separar a aorta da VCI na artéria renal esquerda perto da bifurcação. Em seguida, use suturas de monofilamento de poliamida 10-0 para ligar os pequenos ramos próximos à aorta. Quando a aorta doadora e a VCI estiverem separadas, sature o vaso com solução salina. Cubra a cavidade exposta com gaze umedecida e coloque o doador de lado em uma área estéril.

Agora, coloque o camundongo receptor sob o microscópio e separe a aorta receptora da VCI como acabamos de demonstrar. Em seguida, coloque duas pinças microvasculares de 4 milímetros proximais e distais ao segmento de interesse a aproximadamente 5 milímetros de distância. Em seguida, usando uma microtesoura Vannas-Tübingen, faça uma única aortotomia horizontal e ressecção no máximo 0,5 milímetros da aorta abdominal para acomodar o enxerto aórtico doador.

Retorne o doador ao microscópio e faça um corte de enxerto de 3 a 4 milímetros, conforme demonstrado. Então. Use uma agulha 5/8 de calibre 25 para lavar a aorta excisada com solução salina heparinizada, tomando cuidado para que a ponta da agulha não entre em contato com o vaso, e coloque o recipiente em um recipiente com solução salina heparinizada no gelo.

Dentro de 30 minutos após a excisão, coloque o enxerto aórtico doador na posição ortotópica do receptor, combinando a orientação anatômica do respectivo enxerto com a do receptor. Em seguida, segure suavemente a túnica externa do vaso e use a pinça número 5 para invertê-la ligeiramente. Agora, use a pinça para conduzir uma agulha presa a uma sutura de monofilamento de poliamida 10-0 através de toda a espessura da parede do vaso para prender o enxerto aórtico do doador ao vaso ressecado do receptor.

Para a colocação de pontos contínuos, posicione as suturas de suporte às 9 horas nas extremidades superior e inferior do enxerto. Em seguida, começando na extremidade superior do enxerto a partir das 3 horas, anastomose as extremidades ressecadas com duas suturas contínuas e prenda a sutura à sutura de suporte. Em seguida, vire o enxerto e continue a sutura contínua até a parte dorsal do vaso, encontrando a sutura de origem. Prenda a sutura sem aplicar muita pressão no vaso e repita a sutura para a anastomose inferior.

Quando a anastomose estiver concluída, libere o grampo microvascular distal para permitir o fluxo sanguíneo retrógrado através do vaso. Se não for observado sangramento, solte o grampo proximal. Se nenhuma obstrução sanguínea for observada, use uma pinça para segurar suavemente uma extremidade das suturas de permanência e desvie levemente o vaso para inspecionar a parede posterior do vaso. Nenhum enrugamento deve ser observado. Se um padrão de pulso vigoroso for observado nos vasos doador e receptor, use aplicadores com ponta de algodão para retornar os intestinos à cavidade abdominal.

Por fim, use um porta-agulha e uma pinça Graefe para fechar a parede abdominal com pontos de polipropileno 5-0 e costura contínua. Usando um fechamento subcuticular, feche a camada de pele com as mesmas suturas. A função motora dos membros posteriores pode ser observada para avaliar o sucesso da cirurgia.