Purificação de células precursoras endoteliais CD31⁺ usando classificação de células ativadas por magnetismo

Faça uma cultura aderente de células progenitoras endoteliais ou EPCs, precursoras das células endoteliais microvasculares cerebrais.

A cultura, obtida pela diferenciação de células-tronco pluripotentes, compreende CPE positivas para o marcador de superfície CD31 e células CD31 negativas contaminantes.

Incubar com um reagente de dissociação para separar as células e filtrar para obter uma suspensão unicelular.

Adicione um meio para neutralizar as enzimas, centrifugue para descartar o sobrenadante e ressuspenda as células em um tampão.

Incubar com um reagente bloqueador para inibir os receptores Fc celulares, evitando a marcação inespecífica.

Adicione um anticorpo conjugado com fluoróforo específico para CD31 e incube para marcar os EPCs.

Centrifugue e descarte anticorpos não ligados. Incubar com complexos de anticorpos contendo um anticorpo que se liga aos fluoróforos.

Introduza nanopartículas magnéticas revestidas com polímero e incuba, permitindo que as nanopartículas se liguem ao segundo anticorpo dos complexos.

Usando um campo magnético, isole as células ligadas a nanopartículas.

Rejeitar a suspensão com células CD31 negativas não marcadas e ressuspender as células purificadas