Indução in vitro de junções neuromusculares a partir de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos projetadas

Comece com iPSCs humanas projetadas contendo um gene induzível por doxiciclina de diferenciação de mioblastos ou codificação de proteína MYOD em um meio de células-tronco contendo inibidores de Rho-quinase.

Transfira as células para placas revestidas com ECM e incube para promover a fixação celular.

Enquanto isso, o inibidor inativa as enzimas Rho-quinase intracelulares, aumentando a viabilidade celular.

Substitua o meio por um meio de células-tronco contendo doxiciclina.

A doxiciclina entra nas células e se liga às proteínas ativadoras. Esses complexos se ligam ao promotor, induzindo a expressão gênica em algumas células e produzindo proteínas MIOD, que desencadeiam a diferenciação de células-tronco em células musculares.

Trate as células com um meio de diferenciação miogênica contendo fatores de diferenciação miogênica para promover a formação de miotubos, uma célula muscular multinucleada.

Mais tarde, introduza um meio de indução neural com fatores de crescimento neural.

Esses fatores diferenciam as iPSCs restantes em neurônios motores e células de Schwann que formam uma bainha de mielina ao redor dos neurônios.

Finalmente, substitua o meio por um meio de junção neuromuscular pa