Diferenciando células-tronco pluripotentes induzidas por humanos em neurônios motores funcionais

Pegue as colônias de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos, ou iPSC, cultivadas em uma placa revestida com matriz extracelular.

As iPSCs são geneticamente modificadas para expressar fatores de transcrição que induzem a diferenciação do neurônio motor.

Remova o meio e adicione enzimas para separar as colônias.

Dissocie mecanicamente as células em uma suspensão unicelular e colete-as.

Centrifugue e remova o sobrenadante.

Ressuspenda as células em meios contendo um inibidor que previne a apoptose celular.

Coloque as células em um prato revestido com matriz.

Adicione meios de diferenciação frescos contendo o antibiótico doxiciclina e inibidores de moléculas pequenas.

A doxiciclina induz a expressão do fator de transcrição, enquanto os inibidores bloqueiam vias de sinalização específicas, promovendo a diferenciação de iPSC em progenitores do neurônio motor.

Adicione enzimas para separar as células.

Colete as células e dissocie-as mecanicamente.

Centrifugue e descarte o sobrenadante. Ressuspenda as células em meios neuronais.

Coloque as células em microlâminas revestidas com proteínas de adesão para promover a adesão celular.

Os fatores de crescimento no meio induzem a matur