Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:21 min. • July 8th, 2025
Trate as células-tronco pluripotentes humanas aderidas com lentivírus modificados em um reagente de transfecção.
O vírus carrega genes de resistência a antibióticos e do fator de transcrição neurogênico, controlado pelos elementos responsivos e reguladores da tetraciclina.
O reagente de transfecção carregado positivamente aumenta a fusão viral e sua liberação de conteúdo.
O RNA viral transcreve-se reversamente em DNA e se integra ao DNA de células-tronco, permitindo a expressão de elementos reguladores que produzem proteínas ativadoras.
Adicione um meio basal com derivado de tetraciclina, que forma um complexo com as proteínas ativadoras.
Este complexo se liga ao elemento responsivo à tetraciclina, promovendo a expressão gênica e produzindo os fatores de transcrição neurogênicos que induzem a diferenciação de células-tronco em neurônios.
Adicione um meio basal com um antibiótico para eliminar as células não transfectadas.
Trate as células com uma solução de descolamento contendo enzimas proteolíticas que degradam a matriz extracelular ou ECM e liberam as células.
Remova as enzimas e recoloque as células em poços revestidos com ECM com um meio de maturação, promovendo a maturação ne
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