Utilizando matrizes de multieletrodos para medir a fisiologia sináptica em esferas de cocultura 3D

Pegue uma matriz de multieletrodos estéreis ou MEA, um dispositivo que registra a atividade elétrica das células-alvo.

Adicione uma solução de polímero ao MEA e incuba.

O polímero reveste a superfície do MEA, aumentando assim a propriedade de atração de água da superfície.

Remova o excesso de polímero e lave com água deionizada.

Adicione matriz extracelular, ou ECM, e incube para permitir que ela cubra o MEA. Remova o excesso de ECM.

Em seguida, adicione as esferas de cocultura 3D compreendendo neurônios e astrócitos em um meio adequado.

Incubar para permitir que as esferas adiram à superfície do MEA.

Coloque o MEA em um estágio de cabeça com temperatura controlada de um sistema MEA e registre a atividade elétrica espontânea nos eletrodos.

A atividade elétrica medida corresponde à comunicação nas junções neurais dentro da esfera.

Comece revestindo a superfície de cada matriz de multieletrodos ou MEA com 1 milímetro de poliornitina para tornar a superfície hidrofílica e incubar a 37 graus Celsius por um mínimo de quatro horas. Após a incubação, remova o poliornitino e lave a superfície de cada MEA com água deionizada. Em seguida, adicione 1 mililitro de matriz extracelular e retorne à incubadora por no mínimo quatro horas.

Quando estiver pronto, remova a matriz extracelular e aplique as esferas em 1,5 mililitros de meio na superfície MEA, garantindo que as esferas estejam posicionadas no topo do feixe de eletrodos. Deixe aderir por dois dias. Para medir a atividade elétrica das esferas neurais, coloque o MEA em um estágio de cabeça com temperatura controlada.