Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:59 min. • July 8th, 2025
Pegue seções fixas do cérebro de camundongos contendo células neurais, incluindo células-tronco neurais proliferadas marcadas com EdU, um análogo da timidina.
Contorne as seções com uma marcação hidrofóbica para evitar a propagação da solução.
Adicione um detergente para permeabilizar o tecido. Lave para remover o excesso de detergente.
Adicione um fluoróforo para rotular o EdU. Remova o excesso de fluoróforos.
Usando um microscópio de fluorescência, confirme a coloração adequada das células marcadas com EdU.
Aplique um tampão de bloqueio contendo proteínas para evitar a ligação de anticorpos não específicos. Remova o excesso de proteínas.
Incubar com anticorpos primários que se ligam a proteínas específicas em células-tronco neurais. Remova os anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos secundários conjugados com fluoróforo para ligar os anticorpos primários. Lave os anticorpos não ligados.
Manchar os núcleos com um corante e remover o excesso de corante.
Remova a marcação hidrofóbica, aplique a mídia de montagem e coloque uma lamínula.
Usando um microscópio confocal, observe as seções para visualizar as células-tronco neurais marcadas.
Para manchar as seções de tecido com análogo
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