Quantificando a distribuição de uma proteína pré-sináptica no cérebro de camundongos usando imunofluorescência

Pegue uma fatia de cérebro de camundongo quimicamente fixada embutida em um meio de incorporação de tecido.

Lave a fatia com tampão para remover o meio.

Adicione uma solução que permeabilize as membranas e bloqueie locais de ligação não específicos.

Remova a solução.

Para visualizar proteínas sinápticas neuronais, incube a fatia com anticorpos primários.

Esses anticorpos têm como alvo uma proteína pré-sináptica expressa nas sinapses de regiões cerebrais específicas e uma proteína sináptica expressa de forma onipresente como marcador de referência.

Lave com tampão para remover anticorpos não ligados.

Introduza anticorpos secundários marcados com fluoróforo que tenham como alvo os anticorpos primários.

Lave com tampão para remover anticorpos secundários não ligados.

Contra-corar os núcleos com um corante de ligação ao DNA.

Lave com tampão e monte a fatia usando um meio de montagem adequado.

Visualize a fatia sob um microscópio confocal.

Calcule as proporções médias de intensidade de fluorescência da proteína-alvo e do marcador de referência para analisar a distribuição da proteína-alvo em diferentes regiões do cérebro.

Para preparar as fatias para imunocoloração, use uma pipeta de pl