Análise microscópica de sinapses em fatias de hipocampo de camundongos usando imunofluorescência

Coloque uma fatia de hipocampo do cérebro de um rato em um poço contendo um tampão. A fatia contém uma rede de neurônios que se comunicam por meio de sinapses.

Os terminais dos neurônios pré-sinápticos contêm vesículas cheias de neurotransmissores com transportadores transmembranares característicos, enquanto os terminais pós-sinápticos apresentam proteínas de andaime características que regulam os receptores de neurotransmissores. Ambos servem como marcadores importantes para estruturas sinápticas.

Substitua o tampão por uma solução de bloqueio de permeabilização e incube com agitação para permeabilizar as membranas celulares e bloquear locais de ligação não específicos.

Adicione anticorpos primários direcionados aos marcadores pré-sinápticos e pós-sinápticos e incube com agitação para permitir a ligação.

Lave a fatia, adicione anticorpos secundários conjugados com fluoróforo específicos para os anticorpos primários e incube com agitação no escuro.

Lave a fatia e monte-a em uma lâmina.

Usando um microscópio confocal, identifique a região de interesse e amplie para visualizar as sinapses.

Capture imagens para identificar os marcadores pré-sinápticos e pós-sinápticos marcados com fluoresc