Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures

Ling Zhong; Joshua C. Brown; Clive Wells; Nashaat Z. Gerges

doi:10.3791/50273

Pós-incorporação de Etiquetagem immunogold de proteínas sinápticas em culturas de hipocampo

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Neuroscience

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Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures

Pós-incorporação de Etiquetagem immunogold de proteínas sinápticas em culturas de hipocampo

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13:50 min

April 3, 2013

DOI: 10.3791/50273-v

Ling Zhong¹, Joshua C. Brown¹, Clive Wells², Nashaat Z. Gerges¹

¹Department of Cell Biology, Neurobiology and Anatomy,Medical College of Wisconsin , ²Department of Microbiology and Molecular Genetics,Medical College of Wisconsin

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

A localização e distribuição das proteínas fornecem informações importantes para a compreensão de suas funções celulares. A resolução espacial superior, de microscopia electrónica (ME) pode ser usado para determinar a localização subcelular de um dado antigénio imuno sequência. Para tecidos do sistema nervoso central (SNC), preservando a integridade estrutural durante a antigenicidade manutenção tem sido particularmente difícil em estudos de EM. Aqui, adoptar um procedimento que tem sido utilizada para preservar as estruturas e os antigénios do SNC para estudar e caracterizar proteínas sinápticas no hipocampo de ratos neurónios CA1 piramidais.

O objetivo geral deste procedimento é realizar a marcação ImmunoGold para determinar a localização ultraestrutural de proteínas sinápticas em neurônios parametálicos CA um do hipocampo de ratos. Isso é feito removendo primeiro a região CA uma da fatia organotípica, aparando o canto superior para lembrar a orientação correta e incubando-a em um fixador livre de ósmio no gelo. O segundo passo é desidratar o tecido fixado e deixá-lo endurecer infiltrando-o com resina.

Em seguida, seções ultrafinas são cortadas de tecidos embebidos em resina e colocadas em grades de níquel. A etapa final é realizar imuno-histoquímica nos tecidos de secção. Em última análise, a microscopia imunoeletrônica é usada para determinar a localização de proteínas na sinapse. Okey.

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