Análise da dinâmica do cálcio e alterações do potencial de membrana em um endotélio arteriolar de camundongo

Prenda um tubo endotelial arteriolar colhido de um cérebro de camundongo em uma câmara com um fluxo tampão contínuo.

Coloque a câmara em uma configuração de gravação.

Introduza um corante fluorescente sensível ao cálcio. Incubar para permitir a absorção celular do corante.

Lave para remover qualquer corante não internalizado.

Insira um eletrodo em uma célula endotelial e registre o potencial de membrana em repouso.

Aumente a temperatura do banho para uma temperatura fisiológica para facilitar a ligação do cálcio intracelular ao corante.

Excite o corante e meça a fluorescência para quantificar os níveis basais de cálcio celular.

Introduza um medicamento que se liga a receptores específicos acoplados à proteína G nas células endoteliais, iniciando uma cascata de sinalização.

Essa cascata libera íons de cálcio do retículo endoplasmático para o citoplasma, aumentando a ligação e a fluorescência do corante de cálcio.

Níveis elevados de cálcio citoplasmático também ativam os canais de potássio, facilitando o efluxo de íons potássio e diminuindo o potencial de membrana.

Registre os dados.

O aumento da fluorescência e a diminuição do potencial de membrana indicam um tubo endotelial funcional.

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