Microscopia de dois fótons para estudar a atração do processo microglial em direção a um composto em uma fatia de cérebro de camundongo

Coloque uma fatia de cérebro de camundongo em uma câmara de perfusão contendo aCSF sob um microscópio de dois fótons.

O camundongo é geneticamente modificado para expressar GFP na microglia, permitindo o rastreamento do movimento microglial.

Prenda a fatia com um suporte.

Usando iluminação de campo claro, localize a região de interesse.

Mude para iluminação de fluorescência para visualizar a micróglia.

Encha uma micropipeta com o composto de teste, monte-a em um suporte de seringa e abaixe-a para tocar a fatia.

Ative o modo de imagem de dois fótons, focalizando a luz infravermelha próxima de baixa energia no tecido.

No ponto focal do laser, dois fótons combinam sua energia para excitar a GFP, emitindo fluorescência.

Capture imagens em vários planos Z para focar nos processos microgliais.

Registre a atividade da linha de base, injete o composto e continue gravando.

O composto se liga aos receptores microgliais, desencadeando vias de sinalização que impulsionam a extensão do processo microglial em direção à fonte do composto.

Monitore o aumento da fluorescência perto do local da injeção ao longo do tempo para rastrear o movimento.

30 minutos antes de iniciar a gravação, conecte a bomba peristá