Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 6:37 min. • May 29th, 2025
Prenda um camundongo anestesiado com uma janela craniana sobre seu córtex motor em uma esteira.
O camundongo expressa um repórter de proteína quinase-A em neurônios corticais.
Posicione a esteira sob uma objetiva FLIM de dois fótons.
Adicione uma gota de água entre a objetiva e a janela craniana.
Deixe o mouse acordar e se acostumar com a esteira.
Usando iluminação de campo claro, localize a região de imagem. Feche o invólucro do microscópio para bloquear a luz externa.
Defina os parâmetros de imagem, inicie a rotação da esteira para induzir a locomoção e comece a obter imagens.
A locomoção forçada ativa o PKA, que fosforila o repórter, aproximando seus fluoróforos doadores e aceptores.
O microscópio direciona um laser infravermelho, estimulando o doador a transferir energia para o receptor, reduzindo a vida útil da fluorescência do doador. Quando a
locomoção para, o PKA e o repórter retornam aos seus estados inativos, diminuindo a transferência de energia e aumentando a vida útil da fluorescência do doador.
Analise as imagens para comparar os níveis corticais de PKA durante o repouso e a locomoção.
Pelo menos duas semanas após a instalação da janela craniana, defina o comprimento de onda
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