Imagem de bioluminescência em um modelo de camundongo EAE

Comece com um camundongo anestesiado com encefalomielite autoimune experimental ou EAE. Esta condição causa inflamação nos olhos e no cérebro.

Coloque o mouse em um aparelho de imagem, alinhando a parte superior das costas no centro.

Cubra a parte inferior do mouse com um pano preto para evitar interferência de sinal dessa região.

Use um software de imagem para registrar a posição do mouse.

Pegue uma seringa cheia de um reagente contendo o substrato bioluminescente e injete-a por via intraperitoneal no camundongo.

O reagente circula e entra no local da inflamação, onde o substrato interage com enzimas específicas da inflamação.

A reação enzima-substrato produz um sinal bioluminescente.

Capture imagens em intervalos de tempo regulares para monitorar esse sinal.

O nervo óptico fica próximo à superfície, tornando a bioluminescência ao redor dos olhos proeminente. Em contraste, os sinais do cérebro são fracos à medida que o crânio absorve a luz emitida.

Na imagem, azul indica inflamação leve e vermelho indica inflamação grave.

Para realizar imagens in vivo, mantenha os camundongos sob anestesia com isoflurano de 2 a 2,5% durante todos os procedimentos de imagem. Posicione dois mouses um ao lado do outro no aparelho e posicione as espinhas superiores dos mouses no centro.

Em seguida, proteja o local da imunização com um pano preto. Abra o software para captura de imagem e inicialize a câmera. Em seguida, tire uma imagem de linha de base para avaliar o posicionamento correto dos camundongos.

Em seguida, use o foco B com uma distância de 6,5 centímetros da câmera para capturar todas as imagens. Em seguida, misture o reagente quimioluminescente pronto para uso a 40 miligramas por mililitro antes de encher a seringa. Em seguida, injete 100 microlitros nos camundongos por via intraperitoneal e capture as imagens de bioluminescência 5, 10 e 15 minutos após a injeção.