Visualização do plexo coróide de um cérebro de camundongo usando microscopia eletrônica de varredura

Pegue o plexo coróide de um cérebro de camundongo em uma cesta de amostras.

O tecido, localizado dentro dos ventrículos cerebrais, contém uma camada de células epiteliais com microvilosidades em sua superfície apical.

Incubar o tecido em uma solução fixadora para preservar sua arquitetura celular.

Lave com um tampão para remover o excesso de fixador e estabilizar o pH.

Incube o tecido com tetróxido de ósmio que se liga aos lipídios da membrana celular, preservando a estabilidade da membrana, depois enxágue o excesso de reagente.

Desidrate o tecido usando concentrações crescentes de álcool para evitar distorção do tecido durante a imagem.

Seque o tecido, prenda-o em um suporte de amostra revestido de carbono e, em seguida, cubra-o com uma camada condutora de platina.

Usando microscopia eletrônica de varredura, concentre um feixe de elétrons na superfície. A camada de platina dissipa elétrons, evitando o acúmulo de carga e minimizando os artefatos de imagem.

Um detector captura os elétrons retroespalhados da superfície, produzindo uma imagem do tecido exibindo células epiteliais com microvilosidades.

Para realizar a preparação da amostra para MEV, transfira o plexo coróide recém-isolado para uma solução de fixação recém-feita e incube durante a noite a 4 graus Celsius. Uma vez feito isso, lave a amostra três vezes usando 3 a 5 mililitros de tampão cacodilato de sódio 0,1 molar por cinco minutos cada.

Pós-fixar as amostras em 3 a 5 mililitros de tetróxido de ósmio a 2% em tampão cacodilato de sódio 0,1 molar por 30 minutos. Em seguida, lave as amostras três vezes por cinco minutos cada uma usando 3 a 5 mililitros de água ultrapura. Em seguida, desidrate as amostras em uma série crescente de concentrações de álcool etílico gelado com 15 minutos por solução de álcool etílico. Use um secador de ponto crítico para secar a amostra adequadamente. Posicione a amostra cuidadosamente em uma montagem de amostra com um adesivo de carbono e visualize as amostras do plexo coróide usando SEM.