Análise ultraestrutural de uma seção cerebral de camundongo usando microscopia eletrônica de transmissão

Pegue uma seção de cérebro de camundongo fixada em tetróxido de ósmio embutida em um bloco de resina.

Obtenha uma imagem de seção e alinhe-a com uma imagem de atlas pré-preparada para identificar a região de interesse.

Marque as bordas desta região no bloco.

Aqueça a resina para amolecê-la e retire a região marcada.

Cole a amostra em uma barra de suporte de vidro e corte-a.

Usando um ultramicrótomo, prepare seções semifinas e ultrafinas.

Transfira as seções semifinas e ultrafinas para suportes de vidro e grades de níquel, respectivamente.

Manchar as seções semifinas com um corante que se liga aos ácidos nucléicos, citoplasma rico em ribossomos e à matriz extracelular.

Lave as seções e examine-as sob um microscópio óptico para confirmar a presença da área-alvo.

Observe as seções ultrafinas sob um microscópio eletrônico de transmissão.

O tetróxido de ósmio aumenta a densidade eletrônica das membranas celulares e de organelas, proporcionando alto contraste contra o citoplasma menos denso em elétrons, permitindo a visualização da ultraestrutura celular.

Para mapear uma área de interesse, selecione uma imagem que contenha a área de interesse do atlas de imagens preparado anteriormente. Esboce as