Qual é a importância de usar embriões de camundongos transgênicos?

Embriões de camundongos transgênicos permitem a expressão de genes específicos, facilitando o estudo da função gênica durante a diferenciação neuronal.

Como a luciferina contribui para o processo de imagem?

A luciferina interage com enzimas luciferase para produzir bioluminescência, que pode ser medida para avaliar os níveis de expressão gênica.

Quais técnicas de imagem são utilizadas neste estudo?

O estudo emprega imagem de fluorescência, imagem de bioluminescência e imagem de campo claro para coletar dados abrangentes sobre a expressão gênica.

Quais são as vantagens da imagem de time-lapse?

A imagem de time-lapse permite que os pesquisadores observem mudanças dinâmicas na expressão gênica ao longo do tempo, fornecendo insights sobre o processo de diferenciação.

Esta metodologia pode ser aplicada a outros tipos de células?

Sim, a metodologia pode potencialmente ser adaptada para estudar a expressão gênica em vários tipos de células além das células neuronais.

Monitoramento da expressão gênica em tempo real em fatias cerebrais por meio de imagens tridimensionais

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:00 min • June 17th, 2025

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Comece com um prato contendo fatias corticais de cérebro de embriões de camundongos transgênicos em meios suplementados com luciferina.

A região cortical contém células-tronco neurais que expressam proteínas fluorescentes verdes ou GFPs e um gene de interesse fundido a um gene repórter de luciferase.

Coloque o prato no microscópio stage para medições de fluorescência e luminância.

Capture imagens de teste de fluorescência GFP, com foco em regiões de interesse.

Durante a diferenciação neuronal, as células-tronco começam a expressar o gene de interesse e produzem proteínas fundidas com a enzima luciferase.

A luciferina interage com enzimas luciferase, gerando bioluminescência que reflete diretamente a expressão do gene de interesse durante a diferenciação.

Capture uma imagem de fluorescência para identificar regiões específicas de atividade, uma imagem de bioluminescência para monitorar a expressão gênica dinâmica e uma imagem de campo claro para fornecer informações morfológicas.

Adquira essas imagens tridimensionais de lapso de tempo para visualizar a expressão gênica durante a diferenciação neuronal dentro do ambiente do tecido nativo.

Para visualizar a expressão do repórter de luciferase nas culturas de fatia, selecione o objetivo 40x. E coloque o prato de amostra no microscópio stage. Adquira uma imagem de teste da fluorescência. E defina a posição e o plano de foco para a região de interesse sob a iluminação da luz de excitação apropriada. Em seguida, execute a aquisição de lapso de tempo por luminescência tridimensional, fluorescência e aquisições de campo claro por 24 horas.