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DOI: 10.3791/4350-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a method for tracking photo switched cells in living zebrafish embryos using photoconvertible fluorescent proteins. The technique allows for the monitoring of cell biological events during development through confocal microscopy.
Aqui, apresentamos um método para a troca fotoativada de proteínas fluorescentes fotoconversíveis (PCFPs) no embrião vivo de peixe-zebra e rastreamento adicional de proteína fotoconvertida em pontos de tempo específicos durante o desenvolvimento. Esta metodologia permite o monitoramento de eventos biológicos celulares subjacentes a diferentes processos de desenvolvimento em um organismo vertebrado vivo.
O objetivo geral deste procedimento é rastrear células fototrocadas em um embrião vivo de peixe-zebra. Isso é feito primeiro incorporando um embrião, expressando uma foto específica do tecido, proteína fluorescente conversível em baixa temperatura de fusão. Em seguida, a proteína dentro da região de interesse é completamente convertida em fotos.
Em seguida, o embrião é cuidadosamente removido de aros e mantido em água com ovo a 28,5 graus Celsius até estágios posteriores. Finalmente, o embrião fotoconvertido é novamente incorporado em aros de baixa temperatura de fusão. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram que as células fotoconvertidas podem ser detectadas com precisão em estágios posteriores devido à presença estável da proteína fotoconvertida por meio de microscopia confocal.
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