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Rastreamento de celular utilizando proteínas Photoconvertible Durante o Desenvolvimento Zebrafish
Rastreamento de celular utilizando proteínas Photoconvertible Durante o Desenvolvimento Zebrafish
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JoVE Journal Biology
Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Rastreamento de celular utilizando proteínas Photoconvertible Durante o Desenvolvimento Zebrafish

Full Text
11,981 Views
07:19 min
September 28, 2012

DOI: 10.3791/4350-v

Verónica A. Lombardo1, Anje Sporbert1, Salim Abdelilah-Seyfried1

1Max Delbrück Center for Molecular Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a method for tracking photo switched cells in living zebrafish embryos using photoconvertible fluorescent proteins. The technique allows for the monitoring of cell biological events during development through confocal microscopy.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Developmental Biology

Background

  • Photoconvertible fluorescent proteins (PCFPs) enable visualization of specific cells.
  • Tracking cellular events in live organisms is crucial for understanding development.
  • Zebrafish embryos are a model organism for studying vertebrate development.
  • Confocal microscopy provides high-resolution imaging of biological samples.

Purpose of Study

  • To develop a method for tracking photo switched cells in zebrafish embryos.
  • To monitor the stability of photoconverted proteins during development.
  • To enhance understanding of developmental processes in live vertebrates.

Methods Used

  • Embedding zebrafish embryos in low melting temperature agarose.
  • Expressing tissue-specific photoconvertible fluorescent proteins.
  • Photo converting proteins in the region of interest.
  • Maintaining embryos in egg water at 28.5 degrees Celsius for development.

Main Results

  • Photo converted cells can be detected at later developmental stages.
  • Stable presence of photoconverted proteins allows for precise tracking.
  • Confocal microscopy effectively visualizes the photo switched cells.
  • The methodology can be applied to various developmental studies.

Conclusions

  • The presented method is effective for tracking cellular events in live zebrafish embryos.
  • It provides insights into developmental processes and cell biology.
  • This approach can be utilized in future studies of vertebrate development.

Frequently Asked Questions

What are photoconvertible fluorescent proteins?
Photoconvertible fluorescent proteins are proteins that change their fluorescence properties upon exposure to specific light wavelengths, allowing for the tracking of cells.
Why are zebrafish embryos used in this study?
Zebrafish embryos are transparent and develop rapidly, making them ideal for observing developmental processes in real-time.
What is confocal microscopy?
Confocal microscopy is an imaging technique that provides high-resolution images by using a focused laser beam to scan samples.
How does the photo switching process work?
The photo switching process involves exposing the fluorescent protein to specific light, causing it to change its fluorescence characteristics and allowing for tracking.
What are the potential applications of this methodology?
This methodology can be applied to various studies in developmental biology, cell biology, and neuroscience to track cellular events.
What temperature is optimal for maintaining zebrafish embryos?
The optimal temperature for maintaining zebrafish embryos during development is 28.5 degrees Celsius.

Aqui, apresentamos um método para a troca fotoativada de proteínas fluorescentes fotoconversíveis (PCFPs) no embrião vivo de peixe-zebra e rastreamento adicional de proteína fotoconvertida em pontos de tempo específicos durante o desenvolvimento. Esta metodologia permite o monitoramento de eventos biológicos celulares subjacentes a diferentes processos de desenvolvimento em um organismo vertebrado vivo.

O objetivo geral deste procedimento é rastrear células fototrocadas em um embrião vivo de peixe-zebra. Isso é feito primeiro incorporando um embrião, expressando uma foto específica do tecido, proteína fluorescente conversível em baixa temperatura de fusão. Em seguida, a proteína dentro da região de interesse é completamente convertida em fotos.

Em seguida, o embrião é cuidadosamente removido de aros e mantido em água com ovo a 28,5 graus Celsius até estágios posteriores. Finalmente, o embrião fotoconvertido é novamente incorporado em aros de baixa temperatura de fusão. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram que as células fotoconvertidas podem ser detectadas com precisão em estágios posteriores devido à presença estável da proteína fotoconvertida por meio de microscopia confocal.

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Rastreamento Celular Proteínas Fotoconversíveis Desenvolvimento do Peixe-Zebra Embriogênese Proteínas Fluorescentes Geneticamente Codificadas Processos Morfogenéticos Dinâmicos Proteínas Fotoativáveis Proteínas Fluorescentes Fotoconversíveis (PCFPs) Kaede KikGR Dendra EosFP Desvio Verde para Vermelho Exposição à Luz UV ou Azul Rastreamento do Destino Celular

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