Medir a estabilidade da proteína em Viver embriões Zebrafish Usando Fluorescência Decay Após Fotoconversão (FDAP)

O objetivo geral do experimento a seguir é medir a estabilidade da proteína intracelular e extracelular em embriões vivos de peixe-zebra. Isso é conseguido marcando uma proteína de interesse com uma proteína fluorescente fotoconversível e injetando mRNA, codificando a fusão, bem como um corante fluorescente em embriões de peixe-zebra. Em seguida, a proteína de fusão fotoconversível é fotoconvertida, cujo pulso rotula a proteína.

Neste exemplo, a proteína de fusão é secretada e, em seguida, o decaimento na intensidade de fluorescência fotoconvertida intra e extracelular é monitorado ao longo do tempo e equipado com uma função exponencialmente decrescente para determinar as meias-vidas intracelulares e extracelulares da proteína de fusão. Os resultados mostram a estabilidade in vivo de proteínas de fusão fotoconversíveis com base no decaimento do sinal fluorescente ao longo do tempo. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos da biologia celular e do desenvolvimento.