Name: Captura Laser Microdissecção de neurônios a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas em cultura (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-16T14:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 38 s
Description: Aprenda a usar microdissecção por laser para isolar neurônios puros a partir de células neuroprogenitoras humanas diferenciadas em cultura. Este método permite análise de expressão gênica específica em populações neuronais purificadas.

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Este trabalho foi apoiado por Mérito comentário concessão (NEUD-004-07F) da Administração de Veteranos (para SP).

1. Expansão dos NPCs Humanos (Figura 1) <ol><li> Reviver o lote congelado de NPCs humanos a partir de cérebro fetal (Lonza, Walkersville, MD, EUA) e cultura deles em suspensão em frascos T-75 como neuroesferas (Figura 1A), em meio neurobasal contendo suplementos de proliferação, EGF (10 ng / ml) e FGF (10 ng / ml). </li><li> Após 3 dias em cultura, as neuroesferas transferir para um tubo de 15 ml e centrifugar a 500 rpm durante 5 min. </li><li> Descartar o sobrenadante deixando ~ 100 ul de gama média acima do pellet celular e transferir para um tubo Eppendorf. A pelota de 100 células mL é suficiente para dividir em dois T-75 frascos. Se menos, reduzir o número de garrafas que as células não conseguem proliferar neuroprogenitoras se dividir fina. </li><li> Tritura-se o sedimento com 200 ul de ponta 50x, mantendo a ponta 200 ul contra o fundo do tubo. Divida a suspensão de células igualmente em duas partes e adicioná-los a 2 T-75 frascos (1-2 split), um para a continuidadeexpansão e outro para a diferenciação. </li><li> Continuar a cultura das células neuroprogenitoras para expansão (primeiro balão), alterando o meio cada 4-5 dias, até que as neuroesferas atingir o seu tamanho original de 300-500 mM. Mude meio por centrifugação (500 rpm, 5 min), descarte o meio de idade e adicionar novo meio. </li></ol> 2. Diferenciação de NPCs Humano em uma Cultura Neuron-ricos (Figura 2) <ol><li> Para a diferenciação das células em cultura neuroprogenitoras rico neurónio, colocar uma única lamela para cada poço de uma placa de 24 poços e com revestimento de 100 ug / ml de poli-L-lisina através da adição de 500 uL em cada poço. Incubar os pratos durante 30 min a RT. </li><li> Aspirar o poli-L-lisina solução e lave a placa com água estéril. </li><li> Em seguida, revestir as cavidades da placa com 500 ul de 5 ug / ml de laminina rato e incubar durante 30 min. Após a incubação, lavar os poços com PBS. </li><li> 4 dias após a splitting as células (passo 1.4), transferir os pequenos neuroesferas do frasco rotulado &quot;para a diferenciação &#39;nos pratos revestidos, a uma densidade de ~ 500 neuroesferas por poço de uma placa de 24 poços. </li><li> Depois de 6 horas, quando as neuroesferas anexar ao prato, remover o meio de proliferação e diferenciação adicionar meio consistindo em meio neurobasal, suplemento B27, o NGF (20 ng / ml), BDNF (10 ng / ml), a DBC (100 mM), e ácido retinóico (2 uM). </li></ol> 3. Coloração de imunofluorescência diferenciadas NPCs (Figura 3) <ol><li> Após cultura de células neuroprogenitoras em meio a diferenciação neuronal durante duas semanas, uma cultura rica em neurônio é obtida. Lavar os neurónios uma vez com PBS e, em seguida, corrigi-los em paraformaldeído a 4% durante 30 min. Uma vez fixo, lavar as células três vezes com PBS. </li><li> Incubar as células com tampão de permeabilização (5% de BSA e 0,2% de Triton X-100 em PBS) à temperatura ambiente durante 60 min. </li><li> Incubar os pratos O / N a 4 ° C ind agitador com a seguinte combinação de anticorpos monoclonais e policlonais em 3% de BSA em PBS: NeuN (1:250) e sinapsina (1:250); acetilcolinesterase (1:500) e sinaptofisina (1:250); BDNF (1 : 500) e GAP43 (1:250); STAT3 (1:500) e GFAP (1:1.000). </li><li> Lavar as lamelas três vezes com PBS e depois incubar com anti-coelho-Cy3 e anticorpos secundários, anti-ratinho FITC no escuro à TA durante 90 min. A seguir à incubação, as lamelas lavar três vezes com PBS. </li><li> Coloque 10 ml de meio de montagem sobre uma lâmina de vidro, tirar a lamela da placa de cultura com uma pinça, e colocá-lo de cabeça para baixo no meio de montagem. Delicadamente, limpe qualquer meio de montagem excesso e selar as bordas com unha polonês. </li><li> Examine os neurônios imunomarcadas em um microscópio de fluorescência. </li></ol> 4. Captura Laser Microdissecção de neurônios (Figura 4) <ol><li> Diferenciar NPCs em uma cultura rica em neurônios em PEN slides membranas revestidos com poli-L-lisina e laminina rato seguindo os procedimentos descritos para a Figura 2. </li><li> Executar todas as etapas subseqüentes em condições RNase. </li><li> Mancha as culturas usando HistoGene Stain (Arcturus) para visualizar as células. </li><li> Encontrar as áreas de populações neuronais puros desprovidos de astrócitos, utilizando a imagem de mapa de estrada de todo o slide com o sistema Veritas LCM. Marque os neurônios usando as ferramentas de desenho. </li><li> Realizar captura a laser destas áreas utilizando precisão e automação controlado por computador num processo de dois passos. Primeiro, IR (infravermelho) é acionado em vários pontos com um ajuste de potência do laser de 70 mW e um pulso de 2.500 ms para obter a membrana anexar ao cap. Em seguida, a área marcada é extirpado usando uma ferramenta de corte UV para um nível baixo nível de 10 mV. </li><li> Combinação destes processos de captura selectivamente as zonas marcadas a partir da membrana para PEN CapSure LCM macro cápsulas. Quando a tampa é levantada, a membrana com o neurons adere à tampa. </li><li> Isolar o RNA total a partir de amostras de LCM, utilizando um kit de isolamento de RNA PicoPure (Arcturus) e trata-se com ADNase. </li><li> Amplificar o ARN isolado utilizando o kit de amplificação de RNA RiboAMP seguindo as instruções do kit. </li><li> Realizar a análise em tempo real de RT-PCR utilizando sondas TaqMan para detectar neurofilamento humano de cadeia pesada (hNFHc). </li></ol> Abreviações: AD, doença de Alzheimer, o BDNF, o factor neurotrófico derivado do cérebro, CREB, cíclico proteína de ligação de elemento de resposta a AMP; DBC, dibutiril AMP cíclico; EGF, factor de crescimento epidérmico; FGF, factor de crescimento de fibroblastos; GFAP, proteína ácida fibrilar glial, LCM, laser capturar microdissection; NGF, fator de crescimento do nervo; NPC, neuroprogenitoras célula; PEN, naftalato de polietileno.

<ol><li>Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+identity+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The glial identity of neural stem cells.</a> Nat Neurosci. 6, 1127-1134 (2003).</li>
<li>Galli, R., Gritti, A., Bonfanti, L., Vescovi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells: an overview.</a> Circ. Res. 92, 598-608 (2003).</li>
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<li>Pugazhenthi, S., Wang, M., Pham, S., Sze, C. I., Eckman, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+CREB+expression+in+Alzheimer%27s+brain+and+in+Abeta-treated+rat+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Downregulation of CREB expression in Alzheimer's brain and in Abeta-treated rat hippocampal neurons.</a> Mol. Neurodegener. 6, 60(2011).</li>
<li>Dworkin, S., Mantamadiotis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+CREB+signalling+in+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Ther.+Targets%22%5BJournal%5D)">Targeting CREB signalling in neurogenesis.</a> Expert Opin. Ther. Targets. 14, 869-879 (2010).</li>
<li>Trujillo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+perspectives+of+neural+stem+cell+differentiation%3A+from+neurotransmitters+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Novel perspectives of neural stem cell differentiation: from neurotransmitters to therapeutics.</a> Cytometry A. 75, 38-53 (2009).</li>
<li>Pugazhenthi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Varicella-zoster+virus+infection+of+differentiated+human+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Varicella-zoster virus infection of differentiated human neural stem cells.</a> J. Virol. 85, 6678-6686 (2011).</li>
<li>Kamme, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+microarray+analysis+in+hippocampus+CA1%3A+demonstration+and+validation+of+cellular+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Single-cell microarray analysis in hippocampus CA1: demonstration and validation of cellular heterogeneity.</a> J. Neurosci. 23, 3607-3615 (2003).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse a declarar.

Nós descrevemos neste estudo um modelo de cultura de células ricas em neurônio pela diferenciação de células neuroprogenitoras humanos auto-renovação e um método para isolar uma população pura de neurônios por captura de microdissecção a laser. Nós usamos uma combinação de NGF, BDNF, DBC e ácido retinóico para a diferenciação neuronal de NPCs. DBC é usada para ativar CREB, um fator de transcrição que aumenta a neurogênese 12. O ácido retinóico induz saída do ciclo celular e reduz a população da glia 13.<...

Neurogénese longo da vida, é conhecido por ocorrer na zona subventricular dos ventrículos laterais e na camada subgranular do giro dentado do cérebro de mamíferos adultos 1. Células neuroprogenitoras (NPCs) que se originam a partir destas regiões são células multipotentes que podem se diferenciar em neurônios, astrócitos e oligodendrócitos 2. NPCs gerado interesse devido ao seu potencial para ser transplantadas em pacientes com várias doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, acidente vascular cerebral e doença de Alzheimer (AD) 3. Estudos com NPCs geralmente centrada sobre este ângulo de transplante, mas o potencial de neurónios NPC-derivados como um modelo de cultura de células para determinar o mecanismo de neurodegeneração não foi totalmente explorada. Estudos anteriores têm geralmente utilizados os neurónios pós-mitóticos, isolado a partir de tecidos do cérebro de roedores, que devem ser isoladas para cada experiência em que não sejamauto-renovação. Embora as linhas celulares de neuroblastoma humano, incluindo SH-SY5Y e células SK-N-MC pode ser expandido, elas não têm as características de neurónios primários. NPCs humanos, por outro lado, oferecem vantagens porque eles podem ser expandidos para várias passagens e podem ser diferenciados para gerar uma população de células com as características primárias de neurónios 4,5. No presente estudo, descrevemos um novo protocolo de diferenciação para se obter uma população rica em neurônio consistente de NPCs disponíveis comercialmente isoladas de cérebro fetal humano. Porque essas culturas contêm uma pequena porcentagem de células gliais, precisamos de métodos adicionais para isolar uma população pura de neurônios para caracterização molecular. Captura laser microdissecção (LCM) é um nova técnica pela qual uma população homogénea de células a partir de uma secção de tecido podem ser capturadas selectivamente para análise da expressão do gene 6. O cérebro é um tecido heterogêneo composto por neurônios, células gliais e outros ty celularpes. LCM foi utilizado para determinar a expressão de genes específicos de neurónios analisa 7-10. Temos realizado anteriormente LCM de neurônios do hipocampo de AD (Tg2576) seções do cérebro do rato para mostrar a diminuição da expressão de proteína de ligação elemento de resposta ao AMP cíclico (CREB) e BDNF especificamente nos neurônios do hipocampo 11. No presente estudo, descrevemos os procedimentos para a expansão dos NPCs humanos, a diferenciação neuronal, coloração de imunofluorescência para marcadores neuronais e LCM para o isolamento de neurônios cultivados em PEN lâminas de membrana.

<table><tbody><tr><td>Células neuroprogenitoras (NPCs) </td><td>Lonza</td><td>PT-2599</td><td></td></tr><tr><td>Neurocult NS-A meio basal humano</td><td>Tecnologia de células-tronco</td><td>5750</td><td></td></tr><tr><td>Neurocult NS-A Suplemento de proliferação</td><td>Tecnologia de células-tronco</td><td>5753</td><td></td></tr><tr><td>Neurocult NS-A Suplemento de diferenciação Tecnologia de</td><td>células-tronco</td><td>5754</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento B-27 (50x) </td><td>Invitrogen</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento epidérmico humano</td><td>Tecnologia de células-tronco</td><td>2633</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento de fibroblastos </td><td>Sigma</td><td>F0291</td><td></td></tr><tr><td>Fator neurotrófico derivado do cérebro </td><td>Sinalização celular</td><td>3897S</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento nervoso </td><td>Invitrogen</td><td>13257-019</td><td></td></tr><tr><td>Dibutyryl cíclico AMP</td><td>Sigma</td><td>D-0627</td><td></td></tr><tr><td>poli-L-lisina </td><td>Sigma</td><td>P-5899</td><td></td></tr><tr><td>Laminina de camundongo </td><td>Sigma</td><td>L-2020</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo de ácido retinóico</td><td>Sigma</td><td>R-2625</td><td></td></tr><tr><td>STAT3</td><td>Sinalização celular</td><td>9132</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo GFAP</td><td>Sinalização celular</td><td>3670</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo GAP43</td><td>Laboratórios de transdução</td><td>612262</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo BDNF</td><td>Millipore</td><td>AB1534SP</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo acetilcolinesterase </td><td>Santz cruz</td><td>Sc-11409</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo sinaptofisina</td><td>Abcam</td><td>ab18008-50</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo</td><td>NeuN Chemicon</td><td>MAB377</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo sinapsina</td><td>Novus</td><td>NB300-104</td><td></td></tr><tr><td>Anti camundongo FITC</td><td>Jackson Immuno</td><td>115-095-146</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Laboratórios</td><td></td><td></td>de Pesquisa</tr><tr><td>Anti Coelho Cy3</td><td>Jackson Immuno</td><td>711-165-152</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Laboratórios</td><td></td><td></td>de Pesquisa</tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A1653</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Acros</td><td>21568-2500</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehye </td><td>Fisher</td><td>4042</td><td></td></tr><tr><td>Lamínula (lamínula de círculo grande)</td> <td>Fisherbrand</td><td>12-545-102</td><td></td></tr><tr><td>Meio de montagem (Prolongar Ouro)</td> <td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de caneta</td><td>Applied biosystems</td><td>LCM0521</td><td></td></tr><tr><td>Histogene LCM kit de coloração de seção congelada Applied</td><td>biosystems</td><td>KIT0401</td><td></td></tr><tr><td>RiboAmp RNA Amplification kit</td><td>Applied biosystems</td><td>KIT0201</td><td></td></tr><tr><td>Kit de isolamento de RNA</td><td>Picopure Applied biosystems</td><td>KIT0202</td><td></td></tr><tr><td>CapsureMacro LCM caps</td><td>Applied biosystems</td><td>LCM0211</td><td></td></tr></tbody></table>

captura laser microdissecção de neurônios a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas em cultura

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

Células neuroprogenitoras (NPCs) isoladas a partir do cérebro de feto humano foram expandidas sob condições proliferativas em presença do factor de crescimento epidérmico (EGF) e factor de crescimento de fibroblastos (FGF), para proporcionar um fornecimento abundante de células. NPCs foram diferenciadas na presença de uma nova combinação de factor de crescimento do nervo (NGF), factor neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), dibutiril AMPc (DBC) e ácido retinóico em pratos revestidos com poli-L-lisina e laminina rato para obter neurónio ricas culturas. NPCs também foram diferenciadas na ausência de neurotrofinas, a DBC e ácido retinóico e na presença do factor neurotrófico ciliar (CNTF) para produzir culturas ricas em astrócitos. NPCs diferenciadas foram caracterizadas por coloração de imunofluorescência para um painel de marcadores neuronais incluindo NeuN, sinapsina, acetilcolinesterase, sinaptofisina e GAP43. Proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e STAT3, marcadores de astrócitos, foram detectados em 10-15% dos NPCs diferenciadas. Para facilitarCaracterização molecular específicos do tipo de célula, a captura de microdissecção a laser foi realizada para isolar neurónios cultivados em naftalato de polietileno (PEN) de lâminas de membrana. Os métodos descritos neste estudo fornecem ferramentas valiosas para avançar nossa compreensão do mecanismo molecular da neurodegeneração.

Expansão dos NPCs (Figura 1) Quando neuroesferas são quebradas até uma suspensão de células individuais por meio de trituração, a ponta da pipeta deve tocar no fundo do tubo, de modo que existe uma certa resistência, quando a suspensão é pipetado para cima e para baixo. O número de vezes de trituração vai variar entre os indivíduos e tem de ser decidido, por tentativa e erro, examinando a suspensão de células resultantes com um microscópio. É fundamental para proporcionar densi...

Células neuroprogenitoras Humanos (NPCs) foram expandidas em condições de proliferação. NPCs foram diferenciadas em culturas ricas em neurônios na presença de uma combinação de neurotrofinas. Marcadores neuronais foram detectadas pela técnica de imunofluorescência. Para isolar uma população pura de neurônios, NPCs foram diferenciadas em PEN lâminas de membrana e captura de microdissecção a laser foi realizada.

Captura Laser Microdissecção de neurônios a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas em cultura

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

O objetivo geral do experimento a seguir é desenvolver um modelo de cultura neuronal humana, identificar marcadores neuronais e isolar uma população pura de neurônios para análise de expressão gênica. Isso é alcançado primeiramente expandindo células progenitoras neurais humanas para criar um suprimento contínuo de células progenitoras. Como segundo passo, as células progenitoras neurais são cultivadas na presença de suplementos de diferenciação e fatores neurotróficos de crescimento em placas revestidas com fatores de adesão.Em seguida, realiza-se a coloração por imunofluorescência para marcadores neuronais a fim de determinar o destino das células progenitoras neurais diferenciadas. Por fim, realiza-se a microdissecção a laser de neurônios cultivados em lâminas com membrana PEN para facilitar a análise específica da expressão gênica neuronal. São obtidos resultados que mostram que as células progenitoras neurais diferenciadas são predominantemente de natureza neuronal.Com base na coloração por imunofluorescência e no isolamento de neurônios. Por meio da microdissecção a laser, as células progenitoras neurais humanas podem ser expandidas e diferenciadas em culturas ricas em neurôn

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Este vídeo descreve a manipulação de neurônios cultivados usando laser pinças in vitro.

Usando uma pinça Laser Para Manipulação neurônios isolados In Vitro

Neste vídeo-artigo apresentamos um método para isolar um ou...

Laser Microdissecção Captura de Drosophila Neurônios periféricos

Um método simples e confiável sobre o isolamento e cultura de células-tronco neurais de tecido fetal humano descartado cortical é descrito. Derivados de culturas humanas conhecidas doenças neurológicas podem ser usados ​​para a caracterização de processos patológicos celular e molecular, bem como fornecer uma plataforma para avaliar a eficácia farmacológica.

Geração de células-tronco neurais de Discarded tecido fetal humano Cortical

Fonte: Palma-Tortosa, S., et.al. Culturas organotípicas do córtex humano adulto como um modelo ex vivo para transplante e validação de células-tronco humanas. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o transplante de células-tronco progenitoras neuronais derivadas de células-tronco em fatias de tecido cortical humano. O procedimento envolve isolar e ressuspender células progenitoras em uma matriz de membrana basal, seguida por sua injeção em uma fatia cortical colocada em um conjunto transwell.

Transplante de progenitores neuronais derivados de células-tronco em fatias corticais humanas

Este vídeo demonstra um método para diferenciar células progenitoras neurais humanas (NPCs) em neurônios. Os NPCs são introduzidos em uma co-cultura estabelecida de neurônios corticais de astrócitos de camundongos e ratos, promovendo a diferenciação de NPCs em neurônios. A diferenciação é confirmada pela visualização das células sob um microscópio confocal.

Uma técnica de co-cultura para diferenciar células progenitoras neurais humanas em neurônios

Este vídeo descreve um método para preparar lamínulas de vidro revestidas com poliornitina e laminina para aumentar a adesão e o crescimento de células-tronco neurais. A técnica envolve incubações e lavagens sequenciais, facilitando a formação de uma matriz de suporte que promove o crescimento e a diferenciação das células neuronais, mimetizando estruturas encontradas nos neurônios.

Gerando neurônios piramidais corticais a partir de células-tronco neurais humanas

Nós descrevemos como usar microdissecção a laser de captura (LCM) para obtenção das populações enriquecidas de neurônios do hipocampo ou neurônios individuais a partir de cortes congelados do cérebro do rato feridos para posterior análise de expressão de genes usando quantitativa PCR em tempo real e / ou do genoma inteiro microarrays.

Laser Microdissecção Captura de Populações enriquecida de neurônios ou neurônios individuais para análise de expressão gênica após a lesão cerebral traumática

O isolamento de neurônios de dopamina individuais ou a área tegmental ventral com imunohistoquímica direta ou indireta é demonstrada usando captura a laser microdissection. São discutidos os parâmetros para o isolamento de tecido a partir de uma lâmina de vidro usando um laser de infravermelhos e a partir de lâminas de membrana usando a combinação de um laser infravermelho e ultravioleta.

Captura Laser Microdissection - uma demonstração do Isolamento de Pessoa dopamina Neurônios e região ventral tegmental Entire

Espinhas dendríticas dos neurônios piramidais são os sites da maioria das sinapses excitatórias no córtex cerebral dos mamíferos. Este método descreve a análise quantitativa 3D de morfologias coluna em neurônios piramidais glutamatérgicos corticais humanos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas.

A quantificação tridimensional das espinhas dendríticas de Piramidal neurônios derivados pluripotentes induzidas pelo homem Células-Tronco

Este protocolo demonstra o uso de microplaquetas microfluídicos compartimentadas, injeção moldada em um copolímero cíclico do olefinas aos neurônios cultivados diferenciados das pilhas de haste humanas. Estes chips são pré-montados e mais fáceis de usar do que os tradicionais dispositivos de poli (dimetilsiloxano) compartimentalizados. Vários paradigmas experimentais comuns são descritos aqui, incluindo a rotulagem viral, o isolamento fluídico, a axotomia e a imunocoloração.

Compartimentalização de neurônios derivados de células-tronco humanas dentro de chips de plástico Microfluídico pré-montados

Este protocolo descreve um procedimento detalhado para ressusciar e cultivar os neurônios derivados humanos da pilha de haste que foram diferenciados previamente dos progenitores neural in vitro por semanas múltiplas. O procedimento facilita os ensaios com base em imagens de neuritos, sinapses e marcadores neuronais de expressão tardia em um formato compatível com microscopia de luz e triagem de alto conteúdo.

Resposta pós-diferenciação de neurônios derivados de células-tronco pluripotentes humanas para triagem de alto conteúdo de Neuritogênese e maturação de sinapse

Aprenda a usar microdissecção por laser para isolar neurônios puros a partir de células neuroprogenitoras humanas diferenciadas em cultura. Este método permite análise de expressão gênica específica em populações neuronais purificadas.

Captura Laser Microdissecção de neurônios a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas em cultura

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