Name: Um método sensível para quantificar células senescentes Câncer (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Aprenda a quantificar senescência celular em células cancerígenas usando citometria de fluxo com doxorubicina e substrato C12FDG. Este método rápido e sensível supera as limitações do ensaio β-galactosidase padrão.

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Agradecemos ao SF 4206 Icore (Université de Caen) para o uso da facilidade de citometria. JC recebeu bolsas de pós-doutorado do Conseil de Radioproteção d&#39;EDF e Conseil Régional de Basse-Normandie. Esses dados fazem parte de projetos financiados pelo Ligue Nationale contre le Cancer - Comités de l&#39;Orne et du Calvados.

1. Preparação de C12FDG, bafilomicina A1 e Cultura de Células <ol><li> Dissolve-se o pó C 12 FDG em dimetil sulfóxido (DMSO) a uma concentração final de 20 mM. Alíquota e armazenar a -20 ° C. DMSO deve ser utilizado com condições de segurança apropriadas. </li><li> Dissolve-se o pó A1 bafilomicina em DMSO para uma concentração final de 0,1 mM. Alíquota e armazenar a - 20 ° C. Bafilomicina deve ser utilizado com condições de segurança apropriadas. </li><li> Cultivar a linha de células RPMI 8226, ou outras linhas de células aderentes ou não, em meios contendo 10% de soro fetal bovino e 1% de antibióticos, a 37 ° C, 5% de CO 2. Estimar o número de células necessárias para o experimento. A fim de registar um número suficiente de eventos durante a análise de citometria de fluxo, 5 x 10 5 células são necessários. Para determinar a porcentagem de células senescentes, são necessárias três amostras de células: Amostra sem rótulo, as células não tratadas marcadas com C 12 FDG, células tratadas corados comC 12 FDG. </li><li> Sementes das células 24 h antes do experimento de realização de modo a que as células estão na fase de log da curva de proliferação celular. </li></ol> 2. A indução da senescência <ol><li> Induzir a senescência das células cancerosas, adicionando um medicamento quimioterápico. Concentração da droga e da duração do tratamento deve ser adaptado ao tipo de célula testada. Comece com um tratamento de 48 horas com a concentração final de 50 nM para a doxorrubicina numa concentração de células de cerca de 10 6 células / ml. Não se esqueça de incluir amostra não tratada (controle negativo). </li></ol> 3. Bafilomicina A1 Tratamento <ol><li> Verificar a viabilidade celular em células de mistura com azul de tripano (v / v), com o medicamento quimioterápico utilizado no passo anterior pode levar à apoptose celular. Encher uma câmara de Malassez e contar o número de células azuis (células mortas) e de glóbulos brancos (células vivas). Se a percentagem de viabilidade for inferior a 70%, as células mortas pode ser removed usando um kit adequado para assegurar que as células mortas não influenciará a análise subsequente. </li><li> Remova os meios de cultura e substituir por novos meios de cultura pré-aquecido. Tratar as células com uma concentração final de 100 nM de bafilomicina A1. Bafilomicina A1 é utilizado para neutralizar o pH ácido dos lisossomos. Incubar 1 hora a 37 ° C, 5% de CO 2. </li></ol> 4. C 12 FDG Coloração <ol><li> Dissolve-se 12 C FDG em meios de cultura fresco pré-aquecido, a uma concentração final de 2 mM. </li><li> Adicionar o composto às células na concentração final de 33 uM e incubar 2 h a 37 ° C, 5% de CO 2. Se utilizar as células não aderentes, centrifugar as células a 300 xg por 5 min a 4 ° C (a velocidade pode ter que ser ajustada para o tipo de célula utilizado), lavar 2x com PBS. Ressuspender o sedimento celular em 500 uL de PBS frio. Se estiver usando células aderentes, remova a mídia e lavar 2x com PBS. Colher as células aderentes utilizando uma solução de tripsina e centrifugaras células a 300 xg durante 5 min a 4 ° C (a velocidade pode ter que ser ajustada para o tipo de célula utilizado). Ressuspender o sedimento celular em 500 uL de PBS frio. Em ambos os casos, a concentração de células deve ser de cerca de 10 6 células / ml. </li><li> Realizar um co-imunomarcação para caracterizar ainda mais a população de células senescentes. </li></ol> 5. Análise de Citometria de Fluxo <ol><li> Calibrar o citómetro de fluxo, utilizando os grânulos de controlo recomendadas pelo fabricante do citómetro de fluxo. Para todas as etapas de, pelo menos, 10 eventos de 4 têm de ser registadas. </li><li> Executar a primeira amostra contendo células não marcadas. Prepare a dois parâmetros gráfico exibindo Canal Forward Scatter (FSC) versus Side Canal Scatter (SSC). Defina os tubos fotomultiplicadores (PMT) e definir uma região de interesse excluindo as células mortas e restos celulares que poderiam ter aparecido durante a preparação da amostra. Portão esta região de interesse de um histograma de um parâmetro FL1 exibindo na escala de logdo eixo x e o número de eventos no eixo y. O número total de eventos representa o número de células analisadas. Definir a PMT de modo que as células não marcadas aparecem na primeira década na escala de log do eixo x. Determinar a autofluorescência das células, se necessário. </li><li> Executar a segunda amostra contendo células não tratadas. No histograma um parâmetro exibindo FL1 (fluorescência de C 12 FDG), coloque o cursor após a população mal rotulados. Este limite vai permitir a discriminação entre células não senescentes (células mal rotulados) e células senescentes (células vivas rotulados). </li><li> Executar a terceira amostra contendo células tratadas. Brilhantemente células rotuladas, ou seja, células senescentes aparecem acima do limite determinado na etapa anterior. Avaliar a percentagem de células senescentes, dividindo-se o número de eventos brilhantes por o número total de eventos. Se necessário, a actividade de a-galactosidase β também pode ser estimada utilizando a média de fluorescênciaintensidade. </li></ol>

<ol><li>Hayflick, L., Moorhead, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+serial+cultivation+of+human+diploid+cell+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The serial cultivation of human diploid cell strains.</a> Experimental Cell Research. 25, 585-621 (1961).</li>
<li>Campisi, J., d'Adda di Fagagna, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence%3A+when+bad+things+happen+to+good+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence: when bad things happen to good cells.</a> Nature Review Molecular Cell Biology. 8 (9), 729-740 (2007).</li>
<li>Shay, J. W., Roninson, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+senescence+in+carcinogenesis+and+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of senescence in carcinogenesis and cancer therapy.</a> Oncogene. 23 (16), 2919-2933 (2004).</li>
<li>Bartkova, J., Rezaei, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogene-induced+senescence+is+part+of+the+tumorigenesis+barrier+imposed+by+DNA+damage+checkpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oncogene-induced senescence is part of the tumorigenesis barrier imposed by DNA damage checkpoints.</a> Nature. 444 (7119), 633-637 (2006).</li>
<li>Takacova, S., Slany, R., Bartkova, J., Stranecky, V., Dolezel, P., Luzna, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+damage+response+and+inflammatory+signaling+limit+the+MLL-ENL-induced+leukemogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">DNA damage response and inflammatory signaling limit the MLL-ENL-induced leukemogenesis in vivo.</a> Cancer Cell. 21, 517-531 (2012).</li>
<li>Krtolica, A., Parrinello, S., Lockett, S., Desprez, P. Y., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+fibroblasts+promote+epithelial+cell+growth+and+tumorigenesis%3A+a+link+between+cancer+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Senescent fibroblasts promote epithelial cell growth and tumorigenesis: a link between cancer and aging.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 12072-12077 (2001).</li>
<li>Coppe, J. P., Patil, C. K., Rodier, F., Sun, Y., Munoz, D. P., Goldstein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+secretory+phenotypes+reveal+cell-nonautonomous+functions+of+oncogenic+RAS+and+the+p53+tumor+suppressor%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor.</a> PLoS Biology. 6, 2853-2868 (2008).</li>
<li>Roninson, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+senescence+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor cell senescence in cancer treatment.</a> Cancer Research. 63 (11), 2705-2715 (2003).</li>
<li>Dimri, G. P., Lee, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biomarker+that+identifies+senescent+human+cells+in+culture+and+in+aging+skin+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (20), 9363-937 (1995).</li>
<li>Kurz, D. J., Decary, S., Hong, Y., Erusalimsky, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+%28beta%29-galactosidase+reflects+an+increase+in+lysosomal+mass+during+replicative+ageing+of+human+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated (beta)-galactosidase reflects an increase in lysosomal mass during replicative ageing of human endothelial cells.</a> Journal of Cell Science. 113, 3613-3622 (2000).</li>
<li>Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocols+to+detect+senescence-associated+beta-galactosidase+%28SA-betagal%29+activity%2C+a+biomarker+of+senescent+cells+in+culture+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1798-1806 (2009).</li>
<li>Cahu, J., Bustany, S., Sola, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+secretory+phenotype+favors+the+emergence+of+cancer+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated secretory phenotype favors the emergence of cancer stem-like cells.</a> Cell Death and Disease. Dec 20, 3-e446(2012).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Apresentamos aqui um método baseado em citometria de fluxo para quantificar a senescência celular em células cancerosas vivas. Este método baseia-se na utilização do composto membrana permeável, a 12 C FDG, e pode, portanto, ser utilizado em qualquer tipo de célula e depois de vários tratamentos, desde que o composto é absorvido pelas células. Após a absorção celular, a 12 C FDG é hidrolisado pela β-galactosidase, enriquecido em lisossomas de células senescentes. Após excitação laser, o composto em...

Desde o início dos anos sessenta e sua descoberta por Hayflick e Moorhead, senescência ainda permanece uma curiosidade celular 1. As células humanas não indefinidamente proliferar e, por senescência, Hayflick e Moorhead cunhou o processo de envelhecimento celular. A senescência é uma paragem do ciclo celular estável em que as células permanecem metabolicamente activa em oposição à morte celular. Até à data, quatro mecanismos celulares têm sido mostrados para induzir a senescência: encurtamento dos telómeros, danos no ADN, perturbação da cromatina e a expressão anormal de oncogenes mitogénicos 2. Isto indica que não só as células normais, mas também as células cancerígenas são capazes de sofrer a senescência 3. Por uma questão de facto, as células de cancro sujeitos a senescência foram mostradas para constituir uma barreira para a progressão do tumor 4-5. No entanto, vários relatórios já apontou que, em determinadas circunstâncias, a senescência celular também pode promover malignidade 6-7. Estudar senescência de câncer cells está prestes a tornar-se um impulso na pesquisa do câncer, como atualmente utilizado medicamentos quimioterápicos podem levar a senescência das células cancerosas não apenas in vitro, mas também in vivo 8. O ensaio principal para investigar quanto à presença de células senescentes, é o ensaio de β-galactosidase a um pH ácido. Este ensaio histoquímico reflecte o aumento na biogénese lisossómica ocorrendo na maioria das células senescentes. Resumidamente, exógena de X-gal, aplicada às células, é clivada pela β-galactosidase enriquecido em lisossomas de células senescentes, dando origem a uma cor azul 9. As células senescentes azul podem então ser quantificado num microscópio de campo claro. Embora muito popular, o ensaio β-galactosidase apresenta grandes inconvenientes. Em primeiro lugar, este ensaio é efectuado em células fixadas. Em segundo lugar, é demorado porque implica para quantificar o grau de senescência por contagem de um número significativamente maior de células senescentes, sob um microscópio. Terceiro, este testeNão é tão sensível a discriminação entre as células senescentes e não senescentes inteiramente depende do observador. Discute-se aqui, um ensaio baseado em citometria rápido e sensível para avaliar inexplorado para a presença de células senescentes vivos. Este ensaio baseia-se na hidrólise de uma molécula da membrana permeável, o 5-di-dodecanoylaminofluorescein β-D-galactopiranósido (C 12 FDG), por β-galactosidase enriquecida em células senescentes. Depois da hidrólise e da excitação do laser, a 12 C FDG emite fluorescência verde e pode, portanto, ser detectada por citometria de fluxo 10, 11. A detecção de células senescentes através de citometria de fluxo tem a grande vantagem de ser rápida e sensível. Além disso, a detecção de células senescentes, por citometria de fluxo pode ser combinada com a detecção de outros marcadores celulares. Este ensaio pode ser usado para detectar células senescentes dentro de uma população de células cancerígenas tratadas com quimioterapia, e pode ser rotineiramente ajustadose em cortes de tecidos, após a dissociação celular, na clínica.

<table><tbody><tr><td>5-dodecanoilaminofluoresceína di-&#946;-D-galactopiranosídeo </td><td>Invitrogen</td><td>D-2893</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido Sigma </td><td></td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Bafilomicina A1</td><td>Sigma</td><td>B1793</td><td></td></tr><tr><td>Doxorrubicina</td><td>Sandoz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 meio de cultura celular</td><td>Lonza</td><td>BE12-702</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal de bezerro</td><td>PAA Laboratories GmBH</td><td>A15 101</td><td></td></tr><tr><td>Antibióticos</td><td>Gibco</td><td>5290-018</td><td></td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo Gallios</td><td>Coulter</td><td>A94291</td><td></td></tr></tbody></table>

um método sensível para quantificar células senescentes câncer

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

As células humanas não proliferar indefinidamente. Após a estímulos externos e / ou intrínseco, as células podem morrer ou entrar em uma parada do ciclo celular estável chamado de senescência. Vários mecanismos celulares, tais como o encurtamento dos telómeros e a expressão anormal de oncogenes mitogénicos, têm sido mostrados para causar a senescência. A senescência não está restrita às células normais, as células cancerígenas têm também sido relatada a senescência. Agentes quimioterápicos têm demonstrado induzir a senescência das células cancerosas. No entanto, permanece controverso se a senescência impede ou promove a carcinogênese. Como se pode, eventualmente, ser específico para cada paciente, um método rápido e sensível para avaliar a senescência celular no cancro logo será necessária. Para este fim, o ensaio padrão β-galactosidase, o método utilizado correntemente, apresenta inconvenientes importantes: é demorado e não é sensível. Propomos aqui um fluxo de ensaio baseado em citometria de estudar senescência em live células. Este ensaio tem a vantagem de ser rápido, sensível e pode ser acoplada ao imunomarcação de vários marcadores celulares.

Mieloma múltiplo, uma malignidade hematológica, foi utilizado para avaliar a senescência induzida por um procedimento quimioterápico. Para fazê-lo numa linha de células MM comercialmente disponível (RPMI 8226) foi tratado durante 2 dias com doxorubicina, um fármaco quimioterápico. As células foram então submetidas a um tratamento bafilomicina A1 e ainda incubadas com 12 C FDG. As células foram analisadas por citometria de fluxo. Figura 1 ilustra as diferentes etapas, e mostra que a percentage...

Se senescência impede ou promove tumorigenesis permanece controverso. Desde agentes quimioterápicos podem induzir as células cancerosas senesce, estudando senescência é essencial para propor novas terapias. No entanto, o ensaio de β-galactosidase padrão e amplamente utilizado apresenta grandes inconvenientes. Propomos aqui um fluxo de ensaio baseado em citometria rápido e sensível para quantificar a senescência.

Um método sensível para quantificar células senescentes Câncer

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

O objetivo geral deste procedimento é quantificar a senescência celular de forma rápida e sensível. Aqui demonstramos a utilidade deste método na triagem de fármacos quimioterápicos potenciais. Primeiro, induzir a senescência celular.O fármaco quimioterápico doxorubicina é adicionado às células cancerígenas. Em seguida, Bain A um é aplicado para neutralizar o pH ácido dos lisossomos celulares. Então, o substrato permeável às células beta-galacto C 12 FDG é adicionado após a captação celular.A FDG C 12 é hidrolisada e fluoresce. Uma vez que a beta-GCSE está enriquecida nos lisossomos de células senescentes, essas tornam-se mais fluorescentes do que as células não senescentes. Para quantificar a diferença na fluorescência, as células são analisadas em um citômetro de fluxo. A análise dos dados resultantes permite a quantificação da porcentagem de células cancerosas senescentes sob diferentes condições de tratamento.A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como o ensaio de beta-galactosidase, é que ela facilita a quantificação rápida e sensível de células senescentes. Na verdade, tivemos a ideia para este método ao enfrentar dificuldades na quantificação de

a-sensitive-method-to-quantify-senescent-cancer-cells

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Este vídeo ilustra um ensaio baseado em citometria de fluxo para quantificar células cancerígenas senescentes induzidas por terapia com marcadores de senescência duplos. A detecção e quantificação de células senescentes envolvem o uso de um substrato de β-galactosidase. O substrato é clivado por β-galactosidase lisossômica ativa dentro das células senescentes, produzindo um produto fluorescente que, em conjunto com grânulos de lipofuscina autofluorescentes, marca as células cancerígenas...

Quantificação baseada em citometria de fluxo de células cancerígenas senescentes induzidas por terapia

A senescência celular, o estado irreversível de paragem do ciclo celular, pode ser induzida por vários stresses celulares. Aqui, descrevemos os protocolos para induzir a senescência e métodos celular para avaliar marcadores de senescência.

Técnicas para induzir e quantificar Cellular Senescence

Aqui, vamos discutir uma série de protocolos para indução e validação da senescência celular em culturas de células. Podemos focar diferentes estímulos indutores senescência e descrever a quantificação de marcadores comuns associadas a senescência. Nós fornecemos detalhes técnicos utilizando fibroblastos como modelo, mas os protocolos podem ser adaptados para vários modelos de celulares.

Indução e validação da senescência celular em células humanas primárias

ROS intracelular foi mostrado para jogar um papel importante na indução da senescência celular. Aqui, descrevemos um ensaio sensível para quantificação dos níveis ROS durante a senescência celular. Nós também fornecemos protocolos para avaliar o fenótipo secretor associada a senescência, que alegadamente contribui para várias desordens relacionadas com a idade.

Uma medida quantitativa de espécies reativas de oxigênio e senescência-associado fenótipo secretor em fibroblastos humanos normais durante a senescência induzida pelo Oncogene

A senescência celular é o fator-chave no desenvolvimento de patologias crônicas relacionadas à idade. A identificação da terapêutica que visam as células senescentes mostra a promessa de estender o envelhecimento saudável. Aqui, nós apresentamos um ensaio novo à tela para a identificação do senotherapeutics baseado na medida da atividade associada da senescência β-galactosidase em únicas pilhas.

Ensaio de triagem à base de SA-β-galactosidase para a identificação de medicamentos Senoterapêuticos

Este protocolo descreve o fluxo de trabalho para rotulagem metabólica de células senescentes e não-divisórias com SILAC pulsado, análise de espectrometria de massa não-alvo, e um cálculo simplificado de meias-vidas proteicas.

Medição das Taxas de Rotatividade de Proteínas em Células Cultivadas Senescentes e Não-Divisórias com Rotulagem Metabólica e Espectrometria de Massa

Aqui apresentamos um método baseado em citometria de fluxo para visualização e quantificação de marcadores associados à senescência múltipla em células únicas.

Detecção simultânea baseada em imagens e flutometria de marcadores de senescência fluorescentes múltiplas em células cancerígenas senescentes induzidas por terapia

Um protocolo para quantificação citométrica de fluxo fluorescente de células cancerígenas senescentes induzidas por drogas quimioterápicas em cultura de células ou em modelos de tumores murinos é apresentado. Os procedimentos opcionais incluem co-imunocoloração, fixação de amostras para facilitar a análise de grandes lotes ou pontos de tempo e o enriquecimento de células senescentes viáveis por classificação citométrica de fluxo.

Sonda de β-Galactosidase Associada à Senescência Fluorescente Vermelha Distante para Identificação e Enriquecimento de Células Tumorais Senescentes por Citometria de Fluxo

Este estudo avalia os efeitos proliferativos dos fatores do fenótipo secretor associado à senescência (SASP) de células HeLa senescentes em células HeLa não senescentes usando três modelos in vitro com monitoramento em tempo real. As vantagens e limitações de cada método foram sistematicamente comparadas para entender melhor as interações célula-célula no câncer.

Avaliando o efeito dos fatores SASP na proliferação de células cancerígenas usando uma análise comparativa de três metodologias distintas

Este protocolo apresenta microscopia confocal com luz refletida para a detecção objetiva, por célula única, da atividade beta-galactosidase associada à senescência (SA-β-gal) na fração vascular estromal isolada do tecido adiposo humano. O método é compatível com imunocitoquímica, incorpora controles de pH para avaliação quantitativa e, adicionalmente, oferece uma alternativa mais sensível e menos subjetiva à coloração convencional de SA-β-gal.

Detecção de Senescência usando luz refletida na fração vascular estromal adiposa

Este artigo apresenta um protocolo LysoTracker de células vivas para medir a remodelação lisossômica durante a senescência em fibroblastos humanos IMR-90.

Perfil Lisossômico com LysoTracker para avaliação quantitativa da senescência celular em fibroblastos humanos

Aprenda a quantificar senescência celular em células cancerígenas usando citometria de fluxo com doxorubicina e substrato C12FDG. Este método rápido e sensível supera as limitações do ensaio β-galactosidase padrão.

Um método sensível para quantificar células senescentes Câncer

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