Name: Células-tronco de programação para Therapeutic angiogênese Usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-27T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Aprenda a programar células-tronco para angiogênese terapêutica usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis. Este método demonstra superexpressão de VEGF em células-tronco derivadas de tecido adiposo humano.

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Os autores gostariam de agradecer American Heart Association Nacional Grant Scientist Desenvolvimento (10SDG2600001), Stanford Bio-X Programa Iniciativa Interdisciplinar e Programa de Pesquisa de Stanford Medical Scholars para financiamento.

1. Síntese de Polímero <ol><li> Em uma coifa, pesar 3.523 mg de Diacrilato butanodiol (C) e transferir para um frasco de cintilação de vidro contendo uma barra de agitação. </li><li> Pré-aquecimento de 5-amino-1-pentanol (32) a 90 ° C para solubilizar o sal, depois de uma hotte, pesam-se 1.533 mg de 32 e adicionar ao frasco de cintilação contendo C. Este método irá resultar numa razão molar de C: 32 = 1:1,2. </li><li> Coloque imediatamente o frasco que contém ambas as soluções em uma placa de agitação. Definir velocidade de agitação de 600 rpm. </li><li> Transferir o frasco de cintilação a uma estufa a 90 ° C. Definir velocidade de agitação a 1.000 rpm durante 4 h. Se a barra de agitação fica preso, diminua a velocidade. Após 4 h, a velocidade mais baixa para 300 rpm e mantida a 90 ° C durante mais 12-16 horas. </li><li> Adicionar 5 g de C32 a 10 mL de tetrahidrofurano anidro (THF) num frasco de cintilação de vidro, contendo uma barra de agitação. Embrulhe em papel alumínio e vórtice em alta até que esteja totalmente dissolvido. </li><li> Em um frasco de cintilação de vidro separada Containing uma barra de agitação, adicionar 10 mM de Tetraethyleneglycoldiamine (122). Adicionar 40 ml de THF. </li><li> Coloque os dois frascos (C32 e 122) em uma placa de agitação durante 5 min, em seguida, se combinam. Cubra em papel alumínio e deixe em temperatura ambiente agitação a 400 rpm por 24 horas. O produto final é denominado C32-122. </li><li> Pesar 5 x 50 ml tubos Falcon para cada 5 g lote de C32-122. Note-se a massa de cada tubo em um notebook. </li><li> Transferência de 30 ml de éter dietílico anidro a cada tubo de 50 ml Falcon. </li><li> Transferência 10 ml de C32-122 a cada tubo de 50 ml Falcon. </li><li> Tubos Falcon Vortex vigorosamente em seguida, centrifugar a 2.500 rpm por 2 min. Nota: O polímero extraído vai recolher, na base do tubo. </li><li> Descartar a solução superior e repita os passos 1.9 e 1.11 mais duas vezes. </li><li> Colocar os tubos abertos contendo o extraiu-C32-122 no exsicador e de vácuo durante a noite. Assegurar que todos os tubos são protegidos da luz. </li><li> Pesar todos os tubos contendo C32-122 para determinar a massa final dopolímero extraído. </li><li> Dissolve-se o polímero extraído em DMSO anidro, a uma concentração de 100 mg / ml. </li><li> Armazenar o polímero dissolvido à temperatura de -20 ° C, protegida da luz e da humidade. </li></ol> 2. Sementeira celular <ol><li> Pré-revestimento a base de um frasco de cultura de tecidos T-150 com 0,1% (p / v) de gelatina. A gelatina deve permanecer no balão durante 30-45 min. O revestimento de gelatina ajuda a aderência de ADSCs. </li><li> Aspirar gelatina do frasco T-150 pré-revestido. </li><li> Adicionar 4 x 10 6 ADSCs (≤ passagem 3) para o balão de 20 ml de DMEM contendo 10% de FBS, 1% de Penicilina / Estreptomicina e 10 ng / ml de bFGF. </li><li> Colocar o frasco T-150 na incubadora a 37 ° C, 5% de CO 2 durante a noite. </li><li> Begin processo de transfecção, no dia seguinte. </li></ol> 3. Nanopartículas Preparação e transfecção <ol><li> O procedimento que se segue é para a preparação de nanopartículas contendo o DNA de plasmídeo de 16,1 ug por1,0 x 10 6 células em um polímero de plasmídeo proporção em peso de 30:1. </li><li> Dilui-se o DNA de plasmídeo (1 mg / ml, pVEGF165, Aldevron, ND, EUA) a uma concentração final de 120 ug / ml em acetato de sódio (25 mM) num tubo Falcon de 15 ml. </li><li> Dilui-C32-122 (100 mg / ml) para uma concentração final de 3,6 mg / ml em acetato de sódio (25 mM) num segundo tubo de 15 ml Falcon. </li><li> Combinar o conteúdo de cada um dos tubos Falcon para um único tubo de 15 ml Falcon e vórtice imediatamente em alta durante 10 segundos. </li><li> Deixe o tubo esteja à temperatura ambiente durante 10 minutos para a formação de nanopartículas de ocorrer. </li><li> Durante a incubação, substitua meio em frascos de cultura de tecidos com 7,8 ml DMEM totalmente complementada por 1,0 x 10 6 células transfectadas. </li><li> Transferir a solução de nanopartículas para o frasco de cultura de tecidos e de inclinação para a frente e para trás, para espalhar uniformemente. </li><li> Colocar o frasco de cultura de tecido na incubadora a 37 ° C, 5% de CO 2 durante 4 horas. </li><li> Depois de 2 horas, troque o nanopartigo contendo mídia com DMEM. </li><li> Após uma incubação adicional de 2 horas a 37 ° C, 5% de CO 2, as células estão prontas para injecção in vivo. </li></ol> 4. Membro Posterior Isquemia Procedimento <ol><li> Todos os experimentos foram realizados em conformidade com o cuidado de animais e uso Diretrizes do Comitê da Universidade de Stanford e protocolos Aplac aprovados. Gerando o modelo murino de isquemia dos membros posteriores é realizada como descrito anteriormente. 8 Por favor, consulte a referência para instruções detalhadas. Uma breve descrição é fornecida abaixo. </li><li> Posicione o mouse sob anestesia com 1-3% de isoflurano dose por inalação e fluxo de oxigênio de 1 L / min. Certifique-se de profundidade anestésica por pitada pés, redução da freqüência respiratória, e letargia. </li><li> Remover os pêlos da região abdominal e ambas as áreas hindlimb do mouse com creme de barbear. </li><li> Fazer incisão no centro da coxa medial para linha média e, em seguida, acabar com almofada de gordura sobrejacente a exrepresentar a artéria femoral. </li><li> Ligadura da artéria em dois locais: Local distal (próximo ao joelho) e local proximal (logo distal ao ligamento inguinal). </li><li> Para criar as ligaduras, separe a artéria da veia e fio de seda de sutura 5-0 ao redor da artéria. Amarre a artéria com dois nós para fazer a ligadura. </li><li> Retirar a artéria entre os dois pontos de ligação. </li><li> Lava-se a área cirúrgica com PBS e em seguida a sutura da incisão fechada. </li><li> A anestesia pode agora ser removido. Manter o aquecimento do mouse até re-despertar. Para os cuidados pós-operatórios, 2-4 mg / kg de lidocaína pode ser injetado por via subcutânea no local da incisão, antes de voltar a despertar. Além disso o manejo da dor pode incluir entrega subcutânea de 0,05-0,1 mg / kg Buprenorfina em 12 e 24 horas. Monitorizar o estado de saúde dos ratos uma vez por dia, durante sete dias, observando mudanças no padrão de respiração, dor ostensiva ou angústia, e cor da pele. </li><li> Confirme hindlimb isquemia pelo laser Doppler perfusão de imagem.</li></ol> 5. Injeções de células <ol><li> Quando as células transfectadas e os ratos estão prontos, lavar as células transfectadas com PBS, trypsinize, centrífuga, e depois contar. </li><li> Ressuspender as células a uma densidade de 10 x 10 6 culas por ml em PBS. </li><li> As suspensões celulares devem ser separados em tubos Eppendorf separados a um volume de 110 ul. Isto vai assegurar que cada rato recebe uma quantidade igual de células. </li><li> Colocar cada rato sob anestesia (2,5% de isoflurano, o caudal de 1 L / min de oxigénio). </li><li> Limpe o local da injecção com algodão embebido em álcool. </li><li> Utilizando uma seringa de tuberculina de 27 L, retirar as células para cima e para baixo para dentro da seringa para assegurar uma suspensão homogénea é atingida. Desenha-se 100 ul do volume de suspensão de células para dentro da seringa. </li><li> Injectar a metade da suspensão de células na região do músculo adutor e depois injectar a outra metade para a região de sural. Após a injeção, deixe a seringa no local por pelo menos 15-30 segundos paraimpedir a fuga da suspensão de células. </li><li> Controles adequados para o estudo em animais incluem: 1) células transfectadas com um plasmídeo não codificadora (por exemplo, o plasmídeo sem qualquer actividade biológica), 2) apenas as células, e 3) PBS. </li><li> Quando as injeções são concluída, remova o mouse de anestesia e manter aquecido até que os re-desperta do mouse. </li></ol> 6. Bioluminescência Imagem <ol><li> Para iniciar a imagem de bioluminescência (BLI), anestesiar os ratos, tal como descrito acima. </li><li> Limpe o local da injecção com algodão embebido em álcool. </li><li> Utilizando uma seringa de insulina, de carga de 100 ul de 15 mg / ml de D-luciferina (o substrato para a luciferase do pirilampo). Mantenha substrato da luz. </li><li> Para realizar injeções intraperitoneais, segure camundongos pela pele de suas costas para puxar a pele esticada anterior. Inserir a agulha intraperitonealmente para a região abdominal e injectar 100 ul de substrato. </li><li> Posicione o mouse na câmara de imagem IVIS luciferase sob anestesia. </li><li&gt; Imagem os ratos com um tempo de exposição de 1,0 min. Quando os parâmetros são definidos, começam a adquirir imagens. </li><li> Quando a imagem é adquirida, marcar a região de interesse para medir o sinal da luciferase. Neste caso, marcar o membro isquémico no local de injecção das células. </li><li> Continue a medir o sinal luciferase cada 3-5 min até que o sinal atinge um pico e começa a declinar. Este é o valor utilizado para comparação entre os ratinhos, e ao longo de vários pontos de tempo. </li><li> Quando concluída, remova os ratos da câmara e anestesia. Mantenha ratos quente até re-despertar. </li></ol> 7. Laser Doppler Perfusão Imagem <ol><li> Laser Doppler imagiologia de perfusão é realizada como anteriormente descrito. 8 O procedimento é descrito resumidamente aqui. </li><li> Antes de Doppler o mouse deve ser barbeado para as áreas que recobrem os dois membros posteriores e na região abdominal para evitar artefato devido ao cabelo. </li><li> Quando preparado imagem Doppler para o mousi deve ser anestesiado, tal como descrito acima. </li><li> Aqueça o mouse para 36 ° C em uma placa quente, enquanto controlo da temperatura corporal por termômetro retal. </li><li> Posicione o mouse em uma superfície preta não-reflexivo e manter anestesiado pelo nariz cone. O mouse deve ser colocado em sua superfície dorsal, com seus membros expostos de maneira uniforme. </li><li> Posicione o sensor laser Doppler cerca de 15 cm acima do rato e direcionando o ponteiro laser do sensor para a região da virilha do mouse. </li><li> Quando o mouse eo sensor Doppler estão em posição, é possível criar imagens utilizando o software LDPIwin pressionando o botão Start. </li><li> Medições de perfusão relativos poderiam ser tomadas, indicando os dois membros posteriores (isquêmica e não isquêmica) como a região de interesse (ROI). A proporção de perfusão significativo da isquêmica do membro posterior não isquémico indicará perfusão relativa. </li></ol> 8. Tissue Colheita Procedimento <ol><li> Quando preparado para a colheita do mouse tisprocessar por histologia e / ou processamento bioquímico, o mouse deve ser sacrificado. Aqui, o rato é sacrificado por exposição a 5% de isoflurano para 3-5 min, em seguida, o rato eutanásia por deslocamento cervical. </li><li> Cortar a pele sobrepondo-se em torno do membro posterior circunferencialmente na região abdominal distal e proximal ao dos membros posteriores. A pele é cortada a partir da ventral para as superfícies dorsal, de modo a que a pele pode ser puxado para trás por cima do membro posterior do pé. </li><li> Ao puxar a pele para trás, o membro poderá ser amputada, utilizando uma tesoura de dissecção romba para cortar na articulação pélvica e fêmur. </li><li> Dois tecidos principais são levados para análise: os músculos adutores medial e os músculos gastrocnêmio. </li><li> Para histologia, incorporar um ou ambos os tecidos da temperatura de corte ideal (OCT) para cryosectioning. </li><li> Para a análise bioquímica, recolher um ou ambos os tecidos num Eppendorf de 1,5 ml e submergir num banho de azoto líquido durante pelo menos 2 min. As amostras podem serarmazenados a -80 ° C para futuro processamento. </li></ol>

<ol><li>Deveza, L., Choi, J., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+angiogenesis+for+treating+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Therapeutic angiogenesis for treating cardiovascular diseases.</a> Theranostics. 2, 801-814 (2012).</li>
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<li>Glover, D. J., Lipps, H. J., Jans, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+safe%2C+non-viral+therapeutic+gene+expression+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Towards safe, non-viral therapeutic gene expression in humans.</a> Nat. Rev. Genet. 6, 299-310 (2005).</li>
<li>Dave, U. P., Jenkins, N. A., Copeland, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+insertional+mutagenesis+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene therapy insertional mutagenesis insights.</a> Science. 303, 333(2004).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Aqui nós relatamos um método para programar células-tronco adultas para superexpressão fatores terapêuticos usando não-virais, nanopartículas biodegradáveis. Esta plataforma é particularmente útil para o tratamento de doenças em que as células estaminais pode, naturalmente, de origem, tais como isquemia e cancro. 9-10 Além disso, a plataforma de entrega de genes não virais permite a sobre-expressão transitória de factores terapêuticos, o que é adequado para a maioria dos tecidos e de regeneração de feridas pr...

O objetivo geral desta técnica é promover a angiogênese terapêutica com células-tronco não-viral programados superexpressão fatores terapêuticos no local da isquemia. As células-tronco foram modificadas ex vivo primeiro usando nanopartículas biodegradáveis ​​sintetizados em laboratório, e depois transplantadas em um modelo murino de isquemia dos membros posteriores para validar o seu potencial para aumentar a angiogênese e salvamento tecido. Crescimento vascular controlada é uma componente importante da regeneração de tecidos bem sucedido, bem como para o tratamento de várias doenças isquémicas, tais como acidente vascular cerebral, isquemia e enfarte do miocárdio. Várias estratégias têm sido desenvolvidos para promover o crescimento vascular, incluindo a entrega do factor de crescimento e terapia baseada em célula. Uma Apesar da eficácia observada em modelos animais da doença, estes métodos ainda enfrentam limitações, tais como a necessidade de doses suprafisiológicas de entrega do factor de crescimento, ou insuficiente parácrinaliberação pelas células isoladamente. Uma estratégia potencial para superar as limitações acima é combinar terapia celular e terapia génica, em que as células estaminais são geneticamente programados ex vivo antes da transplantação para sobre-expressar factores terapêuticos desejáveis. Esta abordagem tem sido demonstrada em vários modelos de doença incluindo isquemia dos membros posteriores 2, doença cardíaca 3, cicatrização do osso 4 e lesão neural 5, etc. No entanto, a maioria das técnicas de terapia genética dependem em vectores virais, os quais estão associados a problemas de segurança, tais como a imunogenicidade potencial e mutagénese insercional. Biomateriais mediadas entrega do gene não-viral pode superar essas limitações, mas muitas vezes sofrem de baixa eficiência de transfecção. Para acelerar a descoberta de novos biomateriais para a entrega do gene não-viral eficaz, estudos recentes têm empregue a química combinatória e de alto rendimento abordagem de triagem. Bibliotecas de polímeros biodegradáveis, tais como poli (es-amino βtros) (PBAE) têm sido desenvolvidos e rastreados, o que levou à descoberta de que conduzem polímeros com marcadamente melhorada a eficiência de transfecção em comparação com os homólogos vector poliméricos convencionais. 6-7 Aqui, nós descrevemos a síntese de PBAE e verificação da sua capacidade de transfectar células estaminais derivadas de tecido adiposo (ADSCs), in vitro, seguida de transplante subsequente de ADSCs geneticamente modificados que sobreexpressam o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) em um modelo murino de isquemia dos membros posteriores . Os resultados foram avaliados através do rastreamento destino celular usando imagem de bioluminescência, avaliando reperfusão tecidual utilizando laser Doppler perfusão de imagem (LDPI), e determinar a angiogênese e tecido de resgate pela histologia.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965</td><td></td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal</td><td>Invitrogen</td><td>10082</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15070</td><td></td></tr><tr><td>Fator Básico de Crescimento de Fibroblastos</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>1,4-Butanodiol Diacrilato (90%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>411744</td><td>Siglato: C</td></tr><tr><td>5- amino-1-pentanol (97 %)</td><td>Alfa Aesar</td><td>2508-29-4</td><td>Acrónimo: 32</td></tr><tr><td>Tetraetilenoglicoldiamina > 99 %)</td><td>Molecular Biosciences</td><td>17774</td><td>Acrónimo: 122</td></tr><tr><td>Acetato de Sódio</td><td>G-Biosciences</td><td>R010</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato Tamponado Salino</td><td>Invitrogen</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Tetra-hiofurano Anidro (> 99,9 %)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>401757</td><td></td></tr><tr><td>éter dietílico anidro (> 99 %)</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-4</td><td></td></tr><tr><td>DMSO Anidro (> 99,9%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9391</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferina</td><td>GoldBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Temperatura Ótima de Corte (O.C.T)</td><td>Tissue-Tek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Rato anti-rato CD31</td><td>BD Pharmingen</td><td>550274</td><td></td></tr><tr><td>Alexa IgG Fluor 594 anti-rato</td><td>Invitrogen</td><td>A11007</td><td></td></tr></tbody></table>

células-tronco de programação para therapeutic angiogênese usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Crescimento vascular controlada é crítica para a regeneração de tecidos e cicatrização de feridas bem sucedida, bem como para o tratamento de doenças isquémicas, tais como acidente vascular cerebral, ataque cardíaco ou doenças arteriais periféricas. Entrega direta de fatores de crescimento angiogênicos tem o potencial de estimular o crescimento de novos vasos sanguíneos, mas é freqüentemente associada com limitações como a falta de direcionamento e meia-vida curta in vivo. A terapia genética oferece uma abordagem alternativa ao entregar genes que codificam fatores angiogênicos, mas muitas vezes requer o uso de vírus, e é limitada por questões de segurança. Aqui nós descrevemos uma estratégia desenvolvida recentemente para estimular o crescimento vascular por células-tronco de programação para superexpressão fatores angiogênicos in situ utilizando nanopartículas poliméricas biodegradáveis. Especificamente nossa estratégia utilizada células-tronco como veículos de entrega, tirando partido da sua capacidade de migrar para tecidos isquêmicos in vivo. Usando os vetores poliméricos otimizados, derivadas de tecido adiposoAs células estaminais foram modificados para sobre-expressar um gene que codifica angiogénico factor de crescimento endotelial vascular (VEGF). Nós descrevemos os processos para a síntese do polímero, a formação de nanopartículas, transfecção de células estaminais in vitro, bem como métodos para validar a eficácia das células estaminais que expressam VEGF para promover a angiogénese num modelo de isquemia dos membros posteriores de murino.

Após a mistura em conjunto, o polímero carregado positivamente (C32-122) e com carga negativa de plasmídeo de DNA auto-montagem em nanopartículas. Nanopartículas de formação pode ser confirmada através de análise de electroforese isto é, a complexação entre o C32-122 e o DNA de plasmídeo vai impedir que a mobilização do ADN durante a electroforese. O polímero funciona como um reagente de transfecção melhorada para facilitar a absorção de ADN para dentro das células alvo e a expressão subsequente de proteínas qu...

Descreve-se o método de células-tronco de programação para superexpressão fatores terapêuticos para angiogênese utilizando nanopartículas poliméricas biodegradáveis. Processos descritos incluem a síntese do polímero, a transfecção de células estaminais derivadas de tecido adiposo, in vitro, e para validar a eficácia das células estaminais programadas para promover a angiogénese num modelo de isquemia dos membros posteriores de murino.

Células-tronco de programação para Therapeutic angiogênese Usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar o uso de nanopartículas poliméricas para a superexpressão de genes terapêuticos em células-tronco utilizando um modelo de isquemia de membro posterior marinho. Isso é realizado primeiramente sintetizando polímeros biodegradáveis por meio de uma reação de edição mic em duas etapas, seguida pela fabricação de nanopartículas poliméricas que codificam genes terapêuticos. O segundo passo é transfectar células-tronco derivadas de adipócitos humanos in vitro para superexpressar o fator de crescimento endotelial vascular.A seguir, células-tronco programadas são injetadas intramuscularmente em um membro posterior isquêmico para a produção de fatores terapêuticos. O passo final consiste em monitorar a sobrevivência celular e a reperfusão sanguínea no membro isquêmico ao longo do tempo, utilizando imagem de bioluminescência e imagem de Doppler a laser. Em última análise, podem ser realizadas análises quantitativas de expressão gênica e exames histológicos para demonstrar a expressão localizada de fatores terapêuticos e a eficácia da regeneração do tecido.A vantagem desta técnica em relação aos métodos convencionais para angiogênese é o uso de c

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Bioengineering

Bioengenharia

O procedimento cirúrgico para a entrega de células-tronco embrionárias derivadas de células endoteliais para hindlimb isquêmica é demonstrada, com não-invasivo de monitoramento por imagem de bioluminescência.

Embrionárias com células-tronco derivadas de células endoteliais para tratamento da isquemia dos membros posteriores

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar engenharia de tecidos enxertos de vasos que são funcionais para enxerto em camundongos por semeadura dupla parcialmente célula-tronco pluripotentes induzidas (PPCPE) - derivados de células musculares lisas e PPCPE - células endoteliais derivadas em um biorreator descelulada navio andaime.

Geração e Alongamento das embarcações da engenharia de tecidos em um modelo de rato

Aqui, apresentamos um protocolo para visualizar vasos sanguíneos formação em vivo e em tempo real em 3D andaimes por microscopia do multiphoton. Angiogênese em andaimes geneticamente modificados foi estudado em modelo murino raspagem de osso crítico defeito. Mais novos vasos sanguíneos foram detectados no grupo de tratamento do que em controles.

Visualizando a angiogênese por Multiphoton microscopia In Vivo no andaime de 3D-PLGA/nhập geneticamente modificado para raspagem crítico reparo de defeito ósseo

Este manuscrito descreve a entrega eficiente, não-viral de miR a células endoteliais por um vector de PEI / MNP e a sua magnetização. Assim, em adição à modificação genética, esta abordagem permite a orientação celular magnética e ressonância magnética detectabilidade. A técnica pode ser usada para melhorar as características de produtos de células terapêuticas.

preparação e<em&gt; In Vitro</em&gt; Caracterização de magnetizado miR-modificado Células Endoteliais

Este protocolo descreve a fabricação de um sistema de cultura de células para permitir a propagação de células-tronco em um andaime de polímero condutor para estimulação elétrica em vitro e subsequentes na vivo implantação da célula-tronco-semeado andaime usando um técnica minimamente invasiva.

Eletricamente condutivo Andaime modular e entregar as células-tronco

Este protocolo ilustra um procedimento seguro e eficiente para modificar CD133+ células-tronco hematopoiéticas. A apresentado não-virais, magnética polyplex abordagem pode fornecer uma base para a otimização dos efeitos terapêuticos células-tronco, bem como acompanhamento do produto celular administrado via ressonância magnética.

Protocolo para transferência de MicroRNA na medula óssea-derivado hematopoiéticas células-tronco adultas para habilitar celular engenharia combinada com alvo magnético

Nós descrevemos um procedimento cirúrgico usado para induzir a isquemia periférica nos coelhos com hiperlipidemia e diabetes. Esta cirurgia actua como um modelo pré-clínico para as circunstâncias experimentadas na doença de artéria periférica nos pacientes. A angiografia também é descrita como um meio de medir a extensão da isquemia introduzida e a recuperação da perfusão.

Modelo pré-clínico de isquemia de membros posteriores em coelhos diabéticos

Os progenitores endoteliais derivados de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC-EPs) têm potencial para revolucionar os tratamentos de doenças cardiovasculares e possibilitar a criação de modelos de doenças cardiovasculares mais fiéis. Nisto, o encapsulamento de iPSC-EPs em microambientes tridimensionais do colagénio (3D) e uma análise quantitativa do potencial vasculogenic destas pilhas são descritos.

Modelo in vitro 3D e pipeline computacional para quantificar o potencial Vasculogênico de progenitores endoteliais derivados de iPSC

Este método descreve a cultura das células endotélias derivadas do iPSC como 40 microvasos 3D perfundidos em uma plataforma microfluídica padronizada. Esta plataforma permite o estudo do sprouting angiogenic gradiente-conduzido em 3D, incluindo a anastomose e a estabilização dos sprouts angiogenic em uma maneira escalável e high-throughput.

Ensaio padronizado e escalável para estudar perfundido 3D Angiogênico Sprouting de células endotelias derivadas do iPSC in vitro

Este ensaio utiliza células-tronco embrionárias de camundongos diferenciadas em corpos embrionários cultivadas em gel de colágeno 3D para analisar os processos biológicos que controlam a angiogênese brotada in vitro. A técnica pode ser aplicada para testar drogas, modelar doenças e estudar genes específicos no contexto de deleções embrionariamente letais.

In vitro Ensaio Tridimensional de Angiogênese Utilizando Células-Tronco Embrionárias de Camundongos para Modelagem de Doenças Vasculares e Testes de Fármacos

Este artigo apresenta um protocolo para a entrega precisa guiada por ultrassom de células-tronco vasculares à parede do vaso aórtico. A técnica atinge efetivamente a parede do vaso e promove o reparo vascular em aneurismas e dissecções da aorta.

Entrega de células-tronco guiadas por ultrassom de precisão para reparo vascular em doenças da aorta

Aprenda a programar células-tronco para angiogênese terapêutica usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis. Este método demonstra superexpressão de VEGF em células-tronco derivadas de tecido adiposo humano.

Células-tronco de programação para Therapeutic angiogênese Usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis

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