Tingimento Insetos para Comportamentais Ensaios: o comportamento de acasalamento dos anestesiado Drosophila

O objetivo geral deste procedimento é tornar os insetos visivelmente distintos uns dos outros de maneira não invasiva para sua identificação em experimentos comportamentais. Isso é feito primeiro manchando visivelmente a superfície do alimento drosófilo normal em um frasco de mosca padrão com algumas gotas de corante alimentar. Em seguida, as moscas são adicionadas ao frasco por três horas, momento em que a drosófila deve exibir uma coloração forte do abdômen.

Experimentos de acasalamento podem ser realizados, por exemplo, para observar se as fêmeas acham os machos tingidos de uma cor específica mais atraentes. Em última análise, essa técnica de corante é uma maneira rápida, simples e não invasiva de rotular insetos para facilitar a identificação experimental. A principal vantagem de usar essa técnica em relação aos métodos existentes, como remover parte da asa da mosca, é que ela é mais rápida, menos invasiva e menos propensa a afetar o comportamento subsequente.

Este método pode ser útil em uma ampla variedade de experimentos em que é importante identificar indivíduos ou classes de moscas. Também é fácil de ser usado em experimentos simples em escolas ou faculdades. Demonstrando essa técnica estarão Rudy Verse Bo e Chloe Hayes, ambos estudantes de doutorado aqui na Universidade de Liverpool Depois que o alimento for chamado e solidificado, comece adicionando 0,5 a um mililitro de corante alimentar azul em cima do alimento, espalhe o corante por toda a superfície do frasco.

Em seguida, armazene a comida a quatro graus Celsius por dois dias para permitir que a dieta seja absorvida pela camada superior do alimento. Em seguida, transfira as moscas para o alimento de acordo com as necessidades do experimento. Dentro de um dia, as moscas dietéticas podem ser facilmente distinguidas das moscas não tingidas para realizar um teste de acasalamento com as moscas tingidas.

Use um aspirador para transferir machos virgens individuais para frascos de plástico padrão de 75 por 20 milímetros contendo 20 mililitros de comida. Se estiver realizando um teste de acasalamento de dois machos, coloque metade dos machos em cada grupo de tratamento em frascos com alimentos coloridos. Em seguida, transfira as fêmeas recém-emergidas para frascos de alimentos frescos em grupos de 10.

Agora permita que ambos os sexos amadureçam até a idade de acasalamento na temperatura apropriada para a espécie. Quando a drosófila estiver pronta, exponha os machos experimentais ao tratamento desejado. Por exemplo, as outras moscas estão sendo anestesiadas com dióxido de carbono e rotulam os frascos para identificar o tratamento e o status de cor das moscas no dia anterior ao teste.

Mova as fêmeas para frascos individuais contendo 20 mililitros de comida para aclimatar as moscas ao frasco de acasalamento e rotule os frascos com rótulos neutros para cegar o experimento. Em seguida, adicione uma ou duas moscas machos a cada frasco de acasalamento contendo uma única mosca fêmea. Conforme apropriado.

Comece o teste de acasalamento para coincidir com as luzes que se acendem na incubadora para dois testes de acasalamento de machos. Tome cuidado para que cada macho seja de um tratamento diferente e que uma mosca exiba manchas abdominais. Registre o tratamento e a coloração de cada mosca macho.

Se a cópula ocorrer dentro de duas horas, registre o status dos dados do macho que acasala para testes de acasalamento de um único macho. Registre a hora em que o acoplamento começa e para. Em seguida, calcule os dados de latência e duração do sucesso de acoplamento para o teste.

O melhor modelo encontrado para explicar a variação no efeito do dióxido de carbono. A anestesia contém espécies como um fator. Por exemplo, nesses experimentos representativos, a anestesia com dióxido de carbono não exibiu efeito significativo no sucesso de acasalamento da drosófila.

Moscas pseudo obscuras e drosophila sub obscuras em dois ensaios masculinos para drosophila melanogaster, no entanto, um sucesso de acasalamento significativamente menor foi observado para machos expostos à anestesia com dióxido de carbono com um efeito ainda maior quando drosophila melanogaster foi exposto ao gás na coleta ou um dia antes dos ensaios. Não foram observadas diferenças significativas no acasalamento em moscas coloridas para qualquer uma das três espécies, nem incluindo o tratamento na análise ou o status de acasalamento dos insetos em ensaios de acasalamento único. Nenhuma diferença no acasalamento.

A latência foi observada para qualquer uma das três espécies quando a anestesia com dióxido de carbono foi usada para coletar adultos recém-emergidos. Um efeito na duração do acasalamento foi exibido apenas por moscas subobscuras de drosófila quando expostas ao dióxido de carbono dois dias antes dos testes de acasalamento. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa ideia de como usar o tingimento intestinal como uma técnica não invasiva para rotular suas moscas durante seus experimentos.

Ao tentar este procedimento, é importante testar qualquer impacto do corante de interesse em suas espécies focais. Alguns corantes podem ser tóxicos e algumas cores podem afetar diretamente o sucesso do acasalamento. Por exemplo, o corante alimentar vermelho pode ser preferencial em algumas espécies.

Aqui, usamos essa técnica de corante para distinguir entre moscas em testes de acasalamento competitivos. No entanto, também pode ser usado em uma variedade de outros experimentos nos quais as moscas precisam ser identificadas individualmente, como ensaios para avaliar agressão, defesa territorial, atividade de preferência alimentar ou comportamentos sociais.