Identificação de pares Kinase-substrato utilizando High Throughput Screening

O objetivo geral deste procedimento é identificar quinases que fosforilam um substrato de interesse usando métodos de triagem de alto rendimento. Isso é feito primeiro pela transsecção de células com plasmídeos que expressam quinases FU em glutationa como transferase ou GST. O segundo passo é realizar um pulldown de quinase GST.

Em seguida, as amostras são carregadas em géis, que são então executados e corados com corante azul brilhante kumasi. A etapa final é secar os géis e expô-los ao filme de auto-radiografia. Em última análise, ao desenvolver e interpretar os filmes resultantes, é possível identificar pares de substratos de quinase, pois cada pista é representativa de um ensaio de quinase distinto.