Um método simples para a extração automatizada de fase sólida das amostras de água para análise imunológica de Pequenas Poluentes

O objetivo geral deste método de preparação de amostras é pré-concentrar pequenos poluentes orgânicos a partir de amostras de água, de maneira amigável, econômica e automatizada. Este método pode substituir os processos padrão de SPE ao estudar a contaminação de amostras de água usando métodos de imunodetecção, como imunoensaios de placas ou biossensores. As principais vantagens dessa técnica é que o procedimento SPE é automatizado, enquanto a pegada e o custo dos instrumentos são baixos em comparação com as abordagens tradicionais.

Além disso, os desempenhos do processo de enriquecimento correspondem aos requisitos de análise de imunoensaios, tanto em termos de baixo teor de solvente quanto de eficiência de pré-concentração. Primeiro, filtre a amostra de água de 100 milímetros com um filtro de tamanho de vazamento de dois micrômetros de ponto zero. Colocar a amostra filtrada num frasco de vidro com rosca GL 45.

Prepare 300 microlitros de eluente diluindo o metanol em água deionizada, até 50% do volume em um tubo apertado. Em seguida, prepare uma suspensão de 20 miligramas por mililitro de partículas adsorventes de sílica octadecil adicionando 1.600 microlitros de metanol seguido de 400 microlitros de água deionizada a 40 miligramas de sorvente de fase reversa em um vil de vidro. Feche bem a tampa e agite com um misturador de vórtice.

Coloque uma membrana de nylon com tamanho de poro de 11 micrômetros em uma camada dupla de tecido anti-poeira. Corte duas partes pequenas na membrana com um punção de três milímetros de diâmetro. Em seguida, pegue uma das pequenas membranas com uma pinça de filtro de extremidade plana e coloque-a em um lado da coluna.

Em seguida, aparafuse o conector de fundo plano com o tubo e aperte. Em seguida, desenhe uma seta no corpo da coluna, apontando para a extremidade onde a membrana foi colocada. Neste ponto, prenda a coluna no suporte com a seta apontando para baixo.

Conecte uma seringa descartável vazia de 10 mililitros na extremidade do tubo da coluna usando os conectores de trava inferiores. Agite a suspensão do sorvente com o misturador de vórtice e pipete rapidamente 100 microlitros no centro da coluna. Durante a injeção, aspire suavemente a solução pipetada através da membrana usando a seringa com a outra mão.

A preparação da coluna SPE é muito importante. Você deve se certificar de aspirar adequadamente a solução através da membrana usando a seringa enquanto injeta a suspensão de partículas na coluna. Caso contrário, as partículas não serão compactadas densamente.

Repetir o processo anterior mais duas vezes, agitando a suspensão de material entre todas as etapas de pipetagem, para assegurar uma suspensão homogénea das partículas na solução. Depois de toda a suspensão ter sido carregada e seca por aspiração com uma seringa, mantenha a seringa na posição e coloque a segunda membrana de nylon na parte superior usando a pinça com a outra mão. Em seguida, aparafuse o segundo conector com um tubo e descarte a seringa.

Neste ponto, aperte a coluna no dispositivo SPE usando os conectores de trava inferiores. Conecte o frasco contendo o sample ao dispositivo aparafusando a tampa de segurança GL 45 fornecida. Carregue 200 microlitros de eluente no reservatório de eluente.

Em seguida, carregue 800 microlitros de água deionizada no reservatório de diluição. Verifique se o regulador de pressão está na posição fechada girando-o para trás no sentido horário até que não seja possível mais movimento. Depois de ligar o protótipo, insira os valores 580 para pset e 30 para pset delta.

Para ajustar o regulador de pressão, ligue a bomba. Em seguida, gire manualmente o regulador de pressão até que o valor lido para o pré-impregnado seja inferior, mas próximo a 320 milibar. Depois de parar a bomba, inicie o procedimento SPE pressionando iniciar no canto do modo automatizado.

Quando o procedimento de SPE estiver concluído, feche o pequeno vilão da amostra e armazene a quatro a cinco graus Celsius no escuro, até a análise ELISA. Para limpar o sistema, prepare uma solução de 10 mililitros de metanol a 70% em volume em uma garrafa de vidro com rosca GL 45. Desconecte a coluna SPE e conecte a tubulação com conectores.

No modo automatizado, selecione o arquivo Limpeza e inicie-o com as mesmas configurações de pressão usadas anteriormente para pset, delta pset e preg. A reprodutibilidade do empacotamento do sorvente foi avaliada por secagem e pesagem do sorvente pipetado em viroses de vidro. A reprodutibilidade do tempo de injeção foi testada para as amostras de 100 mililitros.

As concentrações das amostras enriquecidas iniciais e pré-concentradas foram determinadas usando um kit ELISA comercial de 17 beta-estradiol. Fica claro pelas curvas de calibração que a proporção de metanol da amostra enriquecida não afeta a sensibilidade do imunoensaio. Recuperações de 128, mais ou menos 22 por cento, e 107 mais ou menos seis por cento, foram calculadas para água deionizada e água do mar artificial, respectivamente.

Uma vez dominada, a preparação de uma coluna SPE pode ser feita em menos de cinco minutos, se for realizada corretamente. Todo o procedimento SPE pode ser concluído em menos de uma hora. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para que pesquisadores da área de ciências ambientais explorassem o desenvolvimento de métodos de imunodetecção para monitoramento de pequenos poluentes orgânicos.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como preparar amostras de água usando nosso instrumento automatizado e econômico para a análise de poluentes por imunoensaios. Não se esqueça de que trabalhar com poluentes e solventes orgânicos pode ser perigoso, e precauções como o uso de luvas e óculos de proteção adequados devem sempre ser tomadas ao realizar esse processo.