Sintonizar um paralelo Coluna Segmentada fluxo e permitindo a detecção multiplexada

O objetivo geral deste procedimento de HPLC é ajustar uma coluna de fluxo segmentada paralela para permitir a detecção multiplex. Este método responde a questões-chave nas áreas de saúde e bem-estar, ciências ambientais, forense e quaisquer áreas que exijam a análise de amostras complexas, como biodescoberta. Essa técnica permite a análise abrangente da amostra, ao mesmo tempo em que fornece informações sobre as naturezas químicas e bioativas das substâncias em misturas complexas.

Os protocolos de detecção múltipla também permitem uma análise rápida. Esse método permite o desenvolvimento de estratégias para definir a impressão digital química de misturas complexas, como café e vinho, permitindo que os fabricantes diferenciem seus produtos de variedades falsificadas baratas. Inicialmente, pode parecer pouco ortodoxo não enviar a amostra inteira para apenas um detector para uma análise precisa.

No entanto, a concentração do analito dentro de cada fluxo de fluxo é maior do que o fluxo total de uma coluna convencional. Para começar, configure o instrumento de HPLC com água 100% UE e metanol puro para as fases móveis A e B, respectivamente. Se um detector MS for usado, adicione 0,1% de ácido fórmico a ambas as fases móveis e, em seguida, purgue as bombas de HPLC de acordo com as instruções do fabricante.

Monte o MS UV VS. E detectores DPPH. De acordo com as instruções do fabricante. Certifique-se de que os componentes estejam dispostos adequadamente, de modo que o volume morto nas linhas do detector seja mínimo.

Em seguida, defina o comprimento de onda do detector UV VISTA para o comprimento de onda específico da amostra aqui. 280 nanômetros para o detector MS. Use o modo positivo para contagem total de íons ou análise de TIC com o método de detecção de varredura completa.

Equilibre a temperatura e o fluxo de gás do detector MS para os seguintes valores. Temperatura do vaporizador de 500 graus Celsius, temperatura capilar de 350 graus Celsius, fluxo de gás auxiliar de 40 unidades, fluxo de gás de varredura de cinco unidades, taxa de gás de bainha de 60 unidades e tensão de pulverização de 3,5 quilovolts. Para preparar o reagente do radical DPPH, comece dissolvendo 25 miligramas do radical DPPH em 250 mililitros de metanol em um balão volumétrico.

Adicione 250 microlitros de ácido fórmico à solução e sonice a solução por 10 minutos. Em seguida, cubra o frasco e o papel alumínio para evitar a exposição à luz. Em seguida, purgue a bomba com a solução de radical DPPH conforme recomendado pelo fabricante para configurar o sistema de radical DPPH.

Certifique-se de que a linha da bomba esteja presa à entrada de uma peça em T e, em seguida, conecte a bobina de reação de 100 microlitros à saída da peça em T. Conecte o detector à outra extremidade da caixa ENC da bobina de reação, à bobina de reação e a um aquecedor de coluna. Finalmente, defina o detector UV V radical DPPH para 520 nanômetros.

Para construir o fluxo segmentado paralelo ou a coluna PSF, primeiro conecte a entrada da coluna ao instrumento de HPLC. Em seguida, use um pedaço de tubulação para conectar a porta central ao detector MS. Use tubos das mesmas dimensões para conectar uma porta de coluna periférica ao detector UV VS e outra à peça T do sistema de detecção de radicais DPPH.

Bloqueie todas as portas periféricas não utilizadas com rolhas de coluna. Ajustar o caudal da HPLC para um mililitro por minuto da fase B 100% móvel para uma coluna de 4,6 milímetros, diâmetro interno e 250 milímetros de comprimento. Equilibre por 20 minutos.

Para começar a ajustar o sistema PSF, primeiro rasgue os recipientes de coleta vazios. Use esses frascos para coletar separadamente a fase móvel do UV VS. E portas radicais DPPH. Anote o período de coleta e colete pelo menos 500 miligramas de solvente em cada recipiente.

Em seguida, pesar os recipientes de coleta para determinar a massa da fase móvel e dividir a massa pela densidade do metanol para calcular o volume da fase móvel coletada de cada porta. Finalmente, determine a taxa de fluxo para o detector MS e calcule as proporções de fluxo de todos os detectores como uma porcentagem do fluxo total, conforme atribuído no protocolo de texto. Se as proporções de fluxo se desviarem substancialmente dos valores ideais, adicione tubos adicionais quando necessário para ajustar a contrapressão e repita o processo de coleta e cálculo.

Por fim, defina a vazão da bomba de reagente radical DPPH para corresponder à vazão da porta de saída conectada ao detector. Uma análise de HPLC multiplexada foi realizada em uma amostra de café. A capacidade de registrar o radical DPPH UV VS. E os Ms.Chromatograms simultaneamente permitem que os compostos na amostra que responderam positivamente ao radical DPPH sejam facilmente combinados com as respostas UV vs.And

MS com base no alinhamento do tempo de retenção, onde uma resposta positiva foi vista no detector MSS TIC, a massa molecular do pico foi registrada. A facilidade de combinar picos entre diferentes processos de detecção permite uma forma rápida e mais eficiente de triagem e caracterização de uma amostra complexa como o café Uma vez dominada, essa técnica pode ser configurada em apenas cerca de uma hora e pronta para análise de amostra Seguindo este procedimento. Outros detectores, como fluorescência de índice de refração e detecção baseada em produtos químicos, como luminescência química, podem ser usados para obter informações adicionais sobre a amostra.

Depois de assistir a este vídeo, você deve reconhecer a importância dos processos de detecção de multiplexação para obter uma maior compreensão de uma amostra complexa. Além disso, a detecção multiplex usando colunas de fluxo segmentadas paralelas é uma maneira extremamente eficiente de realizar a bioexploração.