Name: Sintonizar um paralelo Coluna Segmentada fluxo e permitindo a detecção multiplexada (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Aprenda a sintonizar colunas de cromatografia com fluxo segmentado paralelo para detecção multiplexada em amostras complexas. Este método de HPLC acelera a análise química e bioativa em campos como saúde, meio ambiente e forense.

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Este trabalho foi apoiado pela UWS e ThermoFisher Scientific. Um dos autores (DK) acusa o recebimento de um Prêmio Australiano de Pós-Graduação.

Nota: Este protocolo contém instruções sobre como usar uma coluna de PSF em um sistema de HPLC associada a múltiplos detectores para detecção multiplexada. O protocolo foi escrito assumindo que o leitor tenha conhecimentos básicos e experiência em cromatografia e vários métodos de detecção de HPLC. Atenção: Por favor, consulte as fichas de dados de segurança de material (MSDS) para todos os materiais e reagentes antes do uso (ou seja, MSDS para metanol). Garantir a utilização de todas as práticas de segurança adequadas ao manusear solventes e High Performance Liquid Chromatography (HPLC) eluente. Assegurar o uso apropriado de controles de engenharia de HPLC, equilíbrio e detector de instrumentação, e assegurar o uso de equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calça de corpo inteiro, e sapatos fechados). 1. Configuração de Instrumento HPLC <ol><li> Prepara-se o instrumento de HPLC com água ultrapura (por exemplo, 100% de água Milli-Q) para Line A e 100% de metanol para a linha B como fase móvel e limpar as bombas como por exigência fabricante. Se um dos detectores utilizados é o MS, como é aqui, adicionar ácido fórmico a 0,1% para ambas as fases móveis A e B. </li><li> Defina-se a HPLC componentes instrumentais e detectores, como ilustrado na Figura 2. Isto exige a colocação conveniente dos detectores em relação à coluna de modo a minimizar o volume morto entre o detector e a coluna. A flexibilidade na configuração do sistema de HPLC é desejável. </li></ol> 2. Configuração de UV-Vis e detectores MS <ol><li> Definir o detector de UV-Vis ao comprimento de onda desejado depende da amostra de interesse (por exemplo, 280 nm). </li><li> Defina o detector MS no modo positivo para Contagem Total Ion (TIC) a análise utilizando o método de detecção Full Scan. Também ajustar os seguintes parâmetros: temperatura MS consequentemente vaporizador 500 ° C, temperatura de capilar 350 ° C, gás bainha fixada a uma taxa de 60 unidades, o fluxo de gás auxiliar40 e varrer o fluxo de gás em 5 unidades, e tensão de 3,5 kV de pulverização. Essas configurações podem ser ajustadas mais tarde para os requisitos específicos de usuários dependentes da amostra a ser analisada. </li></ol> 3. Preparação de 2,2-difenil-1-picrilhidrazil radical (DPPH •) Reagente de configuração de DPPH • Sistema Detector <ol><li> Pesar 25 mg de DPPH • e dissolve-se em 250 ml de metanol num balão volumétrico. </li><li> Adicionar 250 ul de ácido fórmico ao DPPH • reagente. Tapar o frasco em folha para evitar a exposição à luz. </li><li> Sonicar o balão contendo o DPPH • reagente durante 10 min. </li><li> Purga-se o DPPH • bomba com o preparado DPPH • reagente conforme a necessidade do fabricante. </li><li> Configurar o DPPH • sistema de acordo com a Figura 2, anexando a linha da bomba para a entrada de uma peça em T. </li><li> Anexar uma bobina de 100 ul reação ao the de saída da peça em T e prender a outra extremidade da bobina de reacção para o detector. </li><li> Envolvem o bobina de reacção em um aquecedor de coluna e definir a temperatura do aquecedor de coluna a 60 ° C. </li><li> Defina o DPPH • UV-Vis detector para 520 nm. </li></ol> 4. Configuração do PSF Coluna <ol><li> Ligue a entrada da coluna de PSF para o instrumento de HPLC. </li><li> Ligue a porta central para o detector de MS, utilizando um comprimento de 15 cm de tubagem de 0,13 mm ID. </li><li> Conectar um porta periférica para o detector de UV-Vis, utilizando um comprimento de 15 cm de tubagem de 0,13 mm ID. </li><li> Conectar uma outra porta periférica para a peça em T do DPPH • sistema de detecção utilizando um comprimento de 15 cm de tubagem de 0,13 mm ID. </li><li> Bloquear a porta periférica livre utilizando uma rolha de coluna. </li><li> Traga a taxa de fluxo da bomba de HPLC de 1 ml min -1 a 100% da linha B - 100% de metanol (ácido fórmico a 0,1%). </li><li> Equilibrar a coluna com metanol a 100% móvel pHase por 20 min para uma coluna de comprimento x 250 mm 4,6 milímetros id. Desta vez é dimensionada de acordo com as dimensões das outras colunas, o utilizador pode empregar. </li></ol> 5. Ajustando o Coluna PSF para detecção multiplexada <ol><li> Medir a massa de, pelo menos, dois recipientes de recolha vazios (um para a porta ligada ao detector de UV-Vis e um para o detector de DPPH •) utilizando uma balança analítica. </li><li> Recolha fase móvel a partir do UV-Vis e os DPPH • Portas em dois recipientes separados, pré-pesados ​​de recolha (5.1). Grave o período de tempo para a coleção. Recolher pelo menos 500 mg de solvente em cada navio. </li><li> Pesar os vasos de recolha e determinar a massa da fase móvel. Dada a densidade de 0,791 g de metanol é mL -1, determinar o volume de fase móvel recolhidos a partir de cada porta. </li><li> Por diferença, isto é, taxa de fluxo conjunto bomba nominal menos a taxa de fluxo através do DPPH • e UV-Vis Detectoportas de fluxo r, determinação da velocidade de fluxo para o detector de MS. Expresse cada proporção de fluxo como uma percentagem do fluxo total. Nota: Idealmente, as percentagens de fluxo são: para a MS é de 18% do caudal total, ao UV-Vis 22%, para o DPPH • detector de 60%. </li><li> Se não, ajustar as percentagens de fluxo, alterando a pressão de retorno no detector de UV-Vis. Por exemplo, se o fluxo para o UV-Vis é demasiado alta, diminuir a proporção de adição de adicionar uma secção de 15 cm de tubagem de 0,13 mm id para a saída do detector de UV-Vis. Em seguida, repita os passos 5.1 a 5.5. </li></ol> 6. Condições configuração final <ol><li> Definir a taxa de fluxo da bomba de DPPH • reagente para a mesma taxa de fluxo que sai da porta de saída ligada ao DPPH • detector. Nota: A coluna PSF multiplexado com UV-Vis, DPPH • e MS está pronto para análise. </li></ol>

<ol><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+new+concept+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology%3A+Parallel+segmented+outlet+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations%3A+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology%3A+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography%3A+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li>
<li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns%3A+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+%27virtual%27+narrow+bore+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li>
<li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Este estudo envolve a caracterização e definição de perfis de café utilizando HPLC com detecção multiplexada empregando uma coluna paralela fluxo segmentado (PSF). Multiplexada HPLC utilizando colunas PSF permite a caracterização e identificação de entidades químicas chave reduzindo a complexidade de dados da amostra, enquanto a obtenção de um maior grau de informações específicas da molécula dentro de uma fracção do tempo que leva a utilização de processos de detecção de múltiplos convencionais. A coluna PSF não só per...

Colunas Fluxo de Tecnologia ativos Tecnologia de fluxo Ativa (AFT) colunas de cromatografia foram recentemente desenvolvidas para superar a ineficiência nas separações associados a heterogeneidade de fluxo de 1-6 e também para permitir a detecção multiplexada. Nesse particular detalhe comunicação que o processo operacional do paralelo segmentado coluna de fluxo (PSF), com detecção multiplexada. As vantagens funcionais da coluna PSF são: (1) o fluxo a partir da região central radial do leito da coluna é isolado a partir da região periférica ou parede de fluxo, (2) o volume de fase móvel que devem ser processados ​​por uma detecção fonte é reduzida e as fontes (3) detecção podem ser multiplexados para expandir a informação da amostra sem atrasos de detecção de incutir em cada processo de detecção, ou posteriormente, necessitando a divisão de um fluxo de fluxo pós-coluna 7,8. A característica essencial no desenho da coluna PSF que permite que o umdvantage de detecção é a saída multiplexada acessório de montagem e frita de novo. A Figura 1 é uma fotografia da coluna AFT comparada com uma coluna convencional. É importante compreender que o processo de separação obtido utilizando colunas de fluxo paralelas segmentado não é o mesmo que o fluxo de fluxo pós-coluna de divisão. Em uma corrente de fluxo pós-coluna dividir toda a banda de amostra a partir da borda para as extremidades da cauda é igualmente incluídos na amostra (isto é, axialmente), desse modo, cada corrente de escoamento é igual no que respeita à eficiência e sensibilidade; a magnitude da sensibilidade, assim, ser divididos pelas divisões numéricas. Em PSF, no entanto, as amostras do processo de divisão da banda radialmente, não axialmente. Como tal, as amostras de portas centrais vértice do pico - a região mais concentrada do pico. Assim, a sensibilidade mais elevada aqui é como o pico não é diluída pela região da cauda difusa. A amostra eluindo a partir das portas periféricas não é tão eficiente como no CentraL zona, mas, uma vez que a banda é amostrado radialmente, ao invés de axial, a largura do pico é mais estreito do que seria o caso para um processo de amostragem que divide o pico na direcção axial, isto é, uma separação pós-coluna. Por conseguinte, a sensibilidade do detector com uma concentração dependente não é reduzida. Na coluna PSF, o acessório de saída compreende várias portas de saída e no interior desta extremidade encaixe ali está alojado um filtro poroso anelar. A porção interior de canais de frita anulares esta fluir para fora da coluna através da porta de saída central radial, enquanto que a porção radial exterior dos canais de tomada de frita de fluir para fora da coluna através das portas de fluxo de saída periférica ou zona da parede. As porções interior e exterior da frita de saída são separadas por uma barreira impermeável que impede o escoamento transversal entre estas regiões de fluxo 2. Como consequência desta concepção da corrente central de fluxo radial através do leito da coluna está separado do fluxo de parede ins regiãoide a coluna. A parte relativa de fluxo a partir destas duas regiões pode ser variado para se quase qualquer proporção desejada através de uma gestão de pressão, a fim de optimizar vários aspectos funcionais da tecnologia de coluna, tais como a eficiência de separação ou a sensibilidade da detecção. Em essência, este projeto estabelece de forma eficaz dentro da grande coluna de formato de uma coluna de &#39;virtual&#39;, com um diâmetro interno estreito, e, portanto, as funções de coluna como uma coluna na parede menos verdadeiro, superando coluna de leito heterogeneidade e os efeitos de parede 9,10. Os principais benefícios do colunas PSF são melhorias na eficiência da coluna, a minimização do solvente de processamento para a detecção de fonte (s) e permite a detecção multiplexado. No entanto, uma vantagem é que uma vez que a cauda e as regiões de frente de qualquer banda são removidos a partir do perfil de eluição geral na eluição do soluto ou detecção está presente em uma concentração mais elevada do que de outro modo seriam observados para os mesmos solute injecção e a concentração de carga em uma coluna convencional, dependendo da relação de segmentação empregue. Como consequência, é muitas vezes observado um ganho na intensidade do sinal para separações conduzidas em colunas 2 PSF. Na verdade, se o rácio de segmentação é ajustada de tal modo que 25% das saídas de fluxo de cada uma das quatro aberturas de saída, a intensidade do sinal que é observada usando violeta (UV) de detecção ultra mostra praticamente a mesma intensidade de sinal exacto como aparente, utilizando uma convencional coluna onde a totalidade (100%) da fase móvel é analisada 7. Além disso, o ajuste fino da relação de saída de fluxo entre as regiões central e parede permite que a eficiência da coluna para ser optimizado. Os ganhos de eficiência da coluna observada usando colunas AFT não pode ser indicado como um único valor, uma vez que estes ganhos de eficiência são uma função de três factores: (1) a taxa de fluxo, (2) a relação de segmentação, e (3) o factor de retenção de soluto . No entanto, os ganhos de eficiência em comparação com conventional colunas são quase sempre observada, e por vezes, esses ganhos são mais do que 100% do número de pratos teóricos 1,2. A capacidade de ajustar o rácio de segmentação permite que o analista para adaptar efectivamente o diâmetro da coluna &quot;virtual&quot;, e este é um factor importante no que diz respeito ao processo de detecção. Por exemplo, uma coluna virtual de 2.1 mm de diâmetro interno (ID) é estabelecida a partir de uma coluna ID de 4.6 mm quando a relação física segmentação é de 21% de fase móvel eluindo a partir do orifício de saída central radial. Sob estas condições, a coluna id Virtual 2.1 mm realiza com uma eficiência que podem ser mais do que 70% maior do que a coluna convencional ID de 2.1 mm, dependendo da taxa de fluxo, e factor de retenção de soluto 10. O design de coluna PSF corrente que é utilizado para a detecção multiplexado incorpora uma porta de saída de 4-montagem, mas a coluna pode ser equipado com uma porta 2-Também-encaixe final, no entanto, esta limita a detecção tO apenas dois detectores. A operação básica destas colunas é, no entanto, o mesmo, excepto que os quatro detectores podem ser acopladas simultaneamente à saída da coluna PSF 4-porta alargar o âmbito de detecção multiplexado. Além da coluna de tubos conjuntivo pré e pós, os únicos requisitos adicionais para operar uma coluna PSF é tubos que podem ser ligados às portas de saída periférica, e um meio pelo qual a quantidade de fase móvel passa através de cada tubo pode ser medido, costuma ser uma medição de massa ou uma medição volumétrica. Para facilidade de ajuste, o diâmetro interno de toda a tubagem de fluxo de saída deve ser o mesmo. A razão de fluxo entre as aberturas de saída centrais periféricas e radiais é então variado através da utilização de gestão de pressão, simplesmente por alteração do comprimento do tubo localizado na saída periférica encaixe, ou o comprimento de pós tubo detector do orifício de saída central radial. Detecção multiplexado Usando colunas do PSF </strong&gt; Uma vantagem importante das colunas PSF é que cada uma das aberturas de saída de saída pode ser ligado directamente a uma fonte de detecção, permitindo assim a detecção multiplexado. Em um sistema de detecção bem concebido com uma única análise de detecção multiplexada pode proporcionar informação substancial no que diz respeito à natureza dos componentes no interior da amostra. Importante, ensaios destrutivos e não destrutivos podem ser conduzidas exactamente ao mesmo tempo, sem atraso de detecção. Isto permite a atribuição absoluta de, por exemplo, anti-oxidantes, utilizando DPPH • reagente, com componentes para eluir observado com UV e / ou espectrometria de massa (MS) de detecção de respostas de 7,11. Portanto, quatro detectores independentes pode ser operado simultaneamente com porções adequadas de fluxo dirigido para cada detector através de qualquer uma das quatro portas de saída. Uma vez que o fluxo através destas portas pode ser facilmente ajustado a quantidade de soluto, atingindo qualquer dos detectores pode ser ajustado para se adequara sensibilidade do detector dada fonte. Deve notar-se, no entanto, que a migração de soluto mais eficiente é observado através da porta de saída central radial. Cada uma das portas periféricos oferecem eficiência de separação equivalente, o qual quando ajustado para 25% através de cada porta, é apenas ligeiramente menos eficaz do que uma coluna convencional. Como tal, é importante que o detector quantitativa ser configurado para analisar amostras a partir da porta de saída central radial. Ao definir-se uma coluna de PSF para a finalidade de detecção de multiplexação há uma série de considerações que necessitam ser feitas para alcançar resultados eficazes e de alta qualidade; que é dimensões de tubos para cada porta, escolha de qual porta para um tipo de detector e de regulação do fluxo. Dimensões do tubo para cada porta Na cromatografia a extensão de tubagem pós coluna desempenha um papel crucial na eficiência e o desempenho da separação. Dea Granded-volume como resultado da tubagem ID comprida ou larga de saída da coluna para detector irá resultar numa perda de eficiência, sensibilidade e resolução. Assim, as dimensões tubulação apropriada deve ser utilizado quando a configuração da coluna PSF para atingir o potencial máximo na prestação de separação eficiente e proporcionar os benefícios de multiplexação. Porto de Detector A Figura 2 é uma ilustração de uma configuração de detecção exemplo multiplexado (Ultra-Violeta Visível (L-VIS), espectrómetro de massa (MS) e 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH •) de detecção). A ilustração mostra a porta central é ligado ao detector de MS, enquanto que o DPPH • e detectores de UV-vis estão ligados às portas periféricas. Uma vez que a MS é o detector mais sensível dos três, fluir para este detector foi dirigido a partir do orifício de saída central. Como DPPH • detecção é seletiva para o presence de antioxidantes, e a menos sensível e mais tolerante a banda de alargamento, fluir para este detector foi dirigida a partir de uma porta periférica. O UV-Vis era um detector secundário &quot;genérico&quot;, por isso fluir para este detector foi dirigida a partir de uma segunda porta periférica. Ajuste fluxo Uma vez que a tubagem adequada foi ligada a partir de uma porta de detector, o fluxo de saída de cada um dos detectores pode ser ajustado para a quantidade necessária. Uma maneira simples para medir a quantidade de fluxo de saída a partir de cada detector é para pesar a quantidade de fase móvel que elui através de cada porta ao longo de um determinado período de tempo. A percentagem de fluxo pode assim ser determinada, e as razões de fluxo pode ser ajustado por qualquer encurtar ou alongar o tubo ligado à linha de saída de detectores de acordo com os requisitos que se adequa dos detectores de escolha. Diferentes detectores têm diferentes requisitos de fluxo, por exemplo, a célula de fluxo deum detector de fluorescência (FLD) não está caudal limitado, mas deve ser tomado cuidado para evitar o excesso de pressurização da célula de fluxo. Por isso, o controlo de fluxo através do FCDP é normalmente alcançada ajustando a queda de pressão através dos outros detectores e o resto do fluxo, em seguida, passa através da FLD. Um detector que é sensível à quantidade de fluxo que é emitido é o MS. Geralmente, espectrómetros de massa de alta corrente finais podem processar facilmente a cerca de 1 a 1,5 ml / min de fase móvel aquosa moderadamente. Acima desta velocidade de fluxo, inundação da fonte pode fazer as MS inoperável. No entanto, a sensibilidade de detecção na maioria dos espectrômetros de massa é beneficiado usando taxas de fluxo inferiores; portanto, as capacidades de divisão de fluxo de PSF são extremamente úteis para aplicações que envolvem a detecção de MS. Caudais volumétricos alta coluna pode ser utilizada, mas com cargas baixas volume transportado para o detector de MS. Sintonização do fluxo para o detector de MS, contudo, deve ser feita ajustando a queda de pressão antes daDetector MS, em vez de pós-MS. Aqui, a utilização de tubos de diâmetro estreito (0,1 mm ID) é muito útil, como a pressão pode ser facilmente ajustado sem adicionar inadequado volume morto. Dependendo do tipo de detector de o ajustamento da relação de segmentação pode ser feito, quer detector de pré ou pós. Se um detector não destrutivo, tal como é utilizado de UV-Vis, da percentagem de fluxo seria medido e ajustado pós detector. Se um único detector destrutivo é utilizado no multiplex configurar a percentagem de fluxo é determinada pelo cálculo para trás em relação a outras percentagens de fluxo de porta. Se um detector baseado reagente é utilizado, como DPPH •, a percentagem de fluxo é medido detector de pós, sem a adição de reagente; e se dois ou mais destrutivas detectores são usados, então a relação de fluxo é medido pré-detector. Sistemas que podem exigir instrumentação adicional, tal DPPH • Detecção, terá a pressão do sistema extra que pode alterar o fluxopercentagem uma vez ligado ao sistema de detecção. Portanto, a consideração cuidadosa deve ser dada a pressão do sistema de um detector destrutiva, ao ajustar percentual fluxo pré-detector. Independentemente da razão de fluxo que está definido através de qualquer uma das portas, informação quantitativa deve ser obtida por meio da padronização adequada. Uma vez que as razões de fluxo são configurados, no entanto, eles são robustos, e não mudam mesmo sob condições de eluição em gradiente 7, O protocolo de vídeo detalhado que acompanha este manuscrito se destina a mostrar como usar e ajustar o funcionamento da coluna PSF em um modo multiplexado de detecção.

<table><tbody><tr><td>Instrumento</td><td></td><td></td><td>HPLC Vários detectores de escolha para detecção multiplexada. Os detectores de escolha podem exigir instrumentação adicional, por exemplo, bomba.</td></tr><tr><td>Coluna de HPLC de fluxo segmentado paralelo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Não definido</td><td>Em breve a ser comercializado</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Qualquer marca</td><td></td><td>Tubo de HPLC de grau</td></tr><tr><td>PEEK</td><td>Qualquer marca</td><td></td><td>Vários comprimentos e identificação</td></tr><tr><td>Rolhas de coluna</td><td>Qualquer marca</td><td></td><td>Para bloquear portas periféricas não utilizadas.</td></tr><tr><td>Cortador de tubos PEEK</td><td>Qualquer marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Balança Analítica Balança</td><td>Qualquer marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cronômetro</td><td>Qualquer marca</td> Recipientes de coleta de eluentes Qualquer marca <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Frascos de amostra de 1-2 ml podem ser usados como recipientes de coleta de eluente</td></tr></tbody></table>

sintonizar um paralelo coluna segmentada fluxo e permitindo a detecção multiplexada

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

A tecnologia de fluxo ativo (AFT) é uma nova forma de tecnologia de coluna que foi projetada para superar a heterogeneidade do fluxo para aumentar o desempenho de separação em termos de eficiência e sensibilidade e permitir a detecção multiplexada. Essa forma de AFT usa uma coluna de fluxo segmentado paralelo (PSF). Um encaixe de extremidade de saída de coluna PSF consiste em 2 ou 4 portas, que podem ser multiplexadas para conectar até 4 detectores. A coluna PSF não só permite uma plataforma para detecção multiplexada, mas também a combinação de detectores destrutivos e não destrutivos, sem tubulação de volume morto adicional, simultaneamente. A quantidade de fluxo através de cada porta também pode ser ajustada através do gerenciamento de pressão para atender aos requisitos de um detector específico. Para obter a detecção multiplexada usando uma coluna PSF, há uma série de parâmetros que podem ser controlados para garantir o desempenho ideal da separação e a qualidade dos resultados; ou seja, dimensões do tubo para cada porta, escolha da porta para cada tipo de detector e ajuste de fluxo. Este protocolo destina-se a mostrar como usar e ajustar uma coluna PSF funcionando em um modo multiplexado de detecção.

Uma análise por HPLC multiplexada foi realizada utilizando uma coluna de TFA no modo de PSF (Figura 1) e configurado como ilustrado na Figura 2. Este tipo de configuração permitiu uma amostra de café para ser analisada simultaneamente usando UV-Vis, de DPPH • e MS No total Contagem Ion modo (TIC). Os compostos da amostra de café que responderam ao DPPH • poderia, então, ser facilmente compensada aos UV-Vis e MS - respostas de TIC com base no alinha...

Aqui, apresentamos um protocolo para a operação e ajuste de colunas de cromatografia de fluxo segmentado paralelo para permitir a detecção multiplexada.

Sintonizar um paralelo Coluna Segmentada fluxo e permitindo a detecção multiplexada

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

O objetivo geral deste procedimento de CLAE é ajustar uma coluna de fluxo segmentado paralelo para permitir a detecção multiplex. Este método responde a questões fundamentais nas áreas de saúde e bem-estar, ciências ambientais, perícia criminal e quaisquer áreas que exijam a análise de amostras complexas, como a descoberta bioquímica. Esta técnica permite a análise abrangente da amostra, além de fornecer informações sobre as naturezas química e bioativa de substâncias em misturas complexas.Os protocolos de detecção múltipla também permitem uma análise rápida. Este método possibilita o desenvolvimento de estratégias para definir a impressão química de misturas complexas, como café e vinho, permitindo que os fabricantes distingam seus produtos de variedades falsificadas mais baratas. Inicialmente, pode parecer pouco convencional não enviar toda a amostra para apenas um detector para análise precisa.No entanto, a concentração do analito em cada fluxo é maior do que a do fluxo total de uma coluna convencional. Para começar, configure o instrumento de CLAE com água UE a 100% e metanol puro como fases móveis A e B, respectivamente. Se for utilizado um detector de EM, adicione 0,1% de áci

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Um método automático para a identificação de interacção hidrofóbica adequados cromatografia (HIC) meios de comunicação para ser utilizados no processo de purificação de proteínas é apresentada. O método utiliza um meio de pressão-sistema de cromatografia líquida incluindo mistura de tampão automatizado, injecção lacete dinâmica amostra, a selecção de coluna sequencial, multi-comprimento de onda de análise, e recolha de divisão eluato fracção.

Automated interação hidrofóbica Seleção coluna de cromatografia para uso na purificação de proteínas

Um protocolo para o uso de colunas de cromatografia líquida de alta eficiência de fluxo de reação para métodos que empregam derivatização pós-coluna (PCD) é apresentado.

Pós Coluna A derivação utilizando a reação Fluxo cromatografia líquida de alta Colunas

Aqui, apresentamos um protocolo para a operação e otimização da coluna Active Flow Technology (AFT) no modo Curtain flow (CF) para melhorar o desempenho de separação.

Cortina Fluxo Coluna: Optimização da Eficiência e Sensibilidade

Um protocolo rápido para digestão proteolítica com um microrreator tríptico de fluxo interno acoplado a um espectrômetro de massa de ionização por eletrospray (ESI) é apresentado. A fabricação do microrreator, a configuração experimental e o processo de aquisição de dados são descritos.

Enzimática processamento rápido de proteínas para a detecção MS com um micro-reator de fluxo-through

A detecção de fluorescência multicolorida em microfluídica de gotículas normalmente envolve sistemas de detecção baseados em microscópio de epifluorescência volumosos e complexos. Aqui descrevemos um esquema de detecção multicolorido compacto e modular que utiliza uma matriz de fibras ópticas para codificar temporariamente dados multicoloridos coletados por um único fotodetector.

Multicolor detecção de fluorescência para Gota microfluídica Utilizando Fibras Ópticas

Nós demonstramos uma plataforma de microfluidos com uma rede de eléctrodo de superfície integrada que combina a detecção de impulsos resistiva (RPS) com acesso múltiplo por divisão de código (CDMA), para multiplexar detecção e dimensionamento de partículas em vários canais de microfluidos.

Plataforma microfluídico com multiplexada detecção electrónica do Ordenamento do Rastreamento de Partículas

Este protocolo descreve a implementação de um sistema de microscopia óptica de estiramento de tempo de detecção assimétrica para imagens de célula única em fluxo microfluídico ultra-rápido e suas aplicações em citometria de fluxo de imagem.

Citometria de Fluxo de Imagem Microfluídica por Microscopia Óptica de Tempo-estiramento com detecção assimétrica (ATOM)

Este protocolo demonstra um ensaio de alongamento de fluxo única molécula simples, robusta e de alta taxa de transferência para estudar a difusão unidimensional (1D) moléculas ao longo do DNA.

Uma molécula simples, robusto e alta taxa de transferência de fluxo alongamento do ensaio implementação para estudar o transporte de moléculas ao longo de DNA

Detalhadas neste documento são os protocolos de operação e montagem de uma plataforma de triagem microfluídicos modular para a caracterização sistemática das sínteses de nanocrystal semicondutor coloidal. Através de dispositivos de sistema totalmente ajustável, coleção de espectros altamente eficiente pode ser efectuada através de escalas de tempo de reação de 4 ordens de grandeza dentro de um espaço de amostragem massa transferência controlada.

Uma tecnologia Microfluidic Modular para estudos sistemáticos de nanocristais semicondutores coloidal

Aqui apresentamos um protocolo para o procedimento otimizado de embalagem de colunas capilares FlashPack. A aplicação de um protocolo otimizado para uma configuração comum de bomba de pressão de 100 barras permite a embalagem e fabricação 10 vezes mais rápidas de colunas capilares de alto desempenho.

Fabricação simples de coluna capilar de alto desempenho com a abordagem flashpack

A bioquímica visual de molécula única estudada através de câmaras microfluídicas é muito facilitada usando barril de vidro, seringas à prova de gás, conexões estáveis de tubos para células de fluxo e eliminação de bolhas colocando válvulas de comutação entre as seringas e a tubulação. O protocolo descreve armadilhas ópticas duplas que permitem a visualização de transações de DNA e interações intermoleculares.

Uso de pinças ópticas duplas e microfluídicas para estudos de molécula única

Aprenda a sintonizar colunas de cromatografia com fluxo segmentado paralelo para detecção multiplexada em amostras complexas. Este método de HPLC acelera a análise química e bioativa em campos como saúde, meio ambiente e forense.

Sintonizar um paralelo Coluna Segmentada fluxo e permitindo a detecção multiplexada

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