Isolamento e Caracterização do mouse Antral Oócitos Baseado em Nucleolar organização da cromatina

O objetivo geral deste procedimento é detalhar todas as etapas necessárias para caracterizar oócitos antrais de camundongos com base em sua organização cromatina, de acordo com sua capacidade de sustentar totalmente um desenvolvimento embrionário prospectivo. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia do desenvolvimento, como distinguir e isolar dois tipos diferentes de oócitos antrais, SN, nucléolo cercado, e NSN, nucléolo não cercado, residindo no compartimento antral do ovário de mamíferos. Para colher os ovários, comece injetando camundongos fêmeas de três a seis semanas de idade IP com 2,5 unidades internacionais de gonadotrofina sérica de égua grávida.

Dois dias depois, cerca de uma hora antes da colheita, encha uma placa de Petri estéril com meio M2 e adicione várias gotas de 20 micrilitros de meio M2 a uma segunda placa de Petri, cobrindo cada gota com 1,5 mililitros de óleo mineral. Em seguida, transfira todas as placas de Petri para uma incubadora de 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono para permitir que o meio se equilibre. Em seguida, use uma tesoura de dissecção estéril para fazer uma incisão na pele que cobre a parede abdominal, seguida de uma incisão no peritônio do primeiro camundongo injetado com hormônio.