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DOI: 10.3791/54059-v
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Este trabalho apresenta um método de triagem de alto rendimento usando um sistema universal de triagem enzimática genética que pode ser teoricamente aplicado a mais de 200 enzimas. Aqui, o sistema de triagem único identifica três enzimas diferentes (lipase, celulase e fosfatase alcalina) simplesmente alterando o substrato usado (acetato de p-nitrofenila, p-nitrofenil-β-D-celobiosídeo e fenil fosfato).
O objetivo geral desta metodologia é avaliar várias enzimas usando um único sistema de triagem de alto rendimento. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de microrganismos e bioengenharia sobre triagem metagenômica e engenharia enzimática. Desenvolvemos um sistema de triagem de enzimas genéticas que consiste no composto de fenileno que responde ao mutante MPL e seu repórter GFP a jusante.
Uma vez que qualquer gene metagenômico mostra a atividade enzimática de nosso interesse, reagindo com o substrato fornecido, um composto de fenileno do produto da reação ativa o mutante Dmp e desencadeia a expressão do repórter GFP que pode ser facilmente capturado por um medidor de fluorescência. A principal vantagem desta técnica é que, ao contrário das técnicas convencionais de triagem, este método único é aplicável para a triagem de vários tipos de enzimas diferentes usando o substrato apropriado. Demonstrando este procedimento estará Kil Koang Kwon, um estudante de pós-graduação em nosso laboratório.
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