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Multi-enzima Triagem Usando um de alta capacidade Enzyme genética Sistema de Triagem
Multi-enzima Triagem Usando um de alta capacidade Enzyme genética Sistema de Triagem
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Multi-enzyme Screening Using a High-throughput Genetic Enzyme Screening System

Multi-enzima Triagem Usando um de alta capacidade Enzyme genética Sistema de Triagem

Full Text
9,306 Views
08:10 min
August 8, 2016

DOI: 10.3791/54059-v

Haseong Kim1, Kil Koang Kwon1, Wonjae Seong1, Seung-Goo Lee1,2

1Synthetic Biology & Bioengineering Research Center,Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, 2Biosystems and Bioengineering Program,University of Science and Technology, Daejeon, South Korea

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Este trabalho apresenta um método de triagem de alto rendimento usando um sistema universal de triagem enzimática genética que pode ser teoricamente aplicado a mais de 200 enzimas. Aqui, o sistema de triagem único identifica três enzimas diferentes (lipase, celulase e fosfatase alcalina) simplesmente alterando o substrato usado (acetato de p-nitrofenila, p-nitrofenil-β-D-celobiosídeo e fenil fosfato).

O objetivo geral desta metodologia é avaliar várias enzimas usando um único sistema de triagem de alto rendimento. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de microrganismos e bioengenharia sobre triagem metagenômica e engenharia enzimática. Desenvolvemos um sistema de triagem de enzimas genéticas que consiste no composto de fenileno que responde ao mutante MPL e seu repórter GFP a jusante.

Uma vez que qualquer gene metagenômico mostra a atividade enzimática de nosso interesse, reagindo com o substrato fornecido, um composto de fenileno do produto da reação ativa o mutante Dmp e desencadeia a expressão do repórter GFP que pode ser facilmente capturado por um medidor de fluorescência. A principal vantagem desta técnica é que, ao contrário das técnicas convencionais de triagem, este método único é aplicável para a triagem de vários tipos de enzimas diferentes usando o substrato apropriado. Demonstrando este procedimento estará Kil Koang Kwon, um estudante de pós-graduação em nosso laboratório.

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