Dois métodos para Decellularization de tecidos vegetais para aplicações de engenharia de tecidos

Esses métodos podem ajudar a abordar questões-chave no campo de biomateriais, como o desenvolvimento de um andaime com excelentes capacidades de transferência de fluidos com ultraestruturas sofisticadas e fabricação escalável. A principal vantagem dessas técnicas é que elas podem ser aplicadas à maioria das plantas para tecidos do caule sem a necessidade de equipamentos especializados. Primeiro, colete amostras frescas ou congeladas de folhas de F.hispida.

Armazene qualquer amostra fresca restante a menos 20 graus Celsius para uso futuro. Deixe a folha permanecer emersa em água deionizada a 20 a 25 graus Celsius. Use um punção de biópsia limpa para cortar a folha em discos de oito milímetros de diâmetro.

Em seguida, para lavar as amostras de folhas, incube-as em uma placa vibratória em baixa velocidade por cinco a 10 minutos, imersas em água deionizada. Em seguida, prepare 10% em peso por volume de SDS em água deionizada. Depois de preparar a solução SDS, coloque as amostras de folhas em um prato de plástico.

Em seguida, adicione a solução SDS para cobrir completamente as amostras. Coloque as amostras de folhas emersas SDS, cobertas, em uma placa vibratória para evitar a evaporação. Em seguida, incube a amostra de folhas em temperatura ambiente por cinco dias.

Após cinco dias de incubação, substitua a solução de SDS por água deionizada. Incubar as amostras embebidas em água deionizada durante 10 a 15 minutos numa placa vibratória. Em seguida, misture cinco mililitros de surfactante não iônico com 50 mililitros de alvejante.

Adicione esta mistura a 445 mililitros de água deionizada. Em seguida, mergulhe as amostras na solução de alvejante surfactante não iônico recém-preparada. Continue trocando a solução de alvejante surfactante não iônico a cada 24 horas até que as amostras sejam limpas.

Em seguida, deixar as amostras limpas emersas em água desionizada durante dois minutos numa placa vibratória. Para descelularização sem detergente, prepare alvejante a cinco por cento volume por volume em solução de bicarbonato de sódio a 3% em peso por volume. Em seguida, aqueça a solução a 60 a 70 graus Celsius em uma placa quente dentro de uma capela de exaustão.

Assim que a solução atingir a temperatura desejada, molhe as amostras de folhas. Em seguida, reduza a velocidade da placa de agitação para evitar danificar as amostras e procure as amostras visivelmente limpas e transfira-as do banho com cuidado. Por fim, incubar as amostras em água deionizada durante um a dois minutos.

Como todas as amostras são intrinsecamente diferentes, é recomendável verificar o progresso da descelularização aproximadamente a cada 15 minutos para garantir que as amostras não estejam sendo danificadas. Os parâmetros MTM, SAF e UTS são estudados primeiro para investigar as propriedades únicas de andaimes descelularizados das espécies de P.aquatica e F.hispida. De fato, todos os três parâmetros exibem propriedades mecânicas semelhantes usando os métodos de descelularização à base de detergente e sem detergente.

No entanto, a propriedade mecânica UTS de F. hispida mostra um valor médio significativamente maior usando SDS em vez de alvejante para descelularização. O conteúdo de DNA genômico das espécies de plantas desmatadas estudadas também é significativamente reduzido após a descelularização quando comparado às amostras não descelularizadas. Em seguida, a atividade metabólica dos tireoblastos dérmicos humanos também é medida na presença de scaffolds descelularizados de P. aquatica ou Garcinia.

Curiosamente, os andaimes à base de detergente provocaram um impacto reduzido na atividade metabólica celular, mas a lavagem com tampão trishidroclorido, seguido de meio sem soro após a limpeza do SDS, diminui o impacto na atividade metabólica celular quando comparado à lavagem apenas com água deionizada. Finalmente, o crescimento das células-tronco mesenquimais coradas com calcina na superfície da estrutura foliar de F. hispida é mostrado aqui. Uma vez dominadas, essas técnicas podem ser concluídas de cerca de sete dias a apenas 15 minutos quando executadas corretamente.

Ao realizar esses procedimentos, é importante lembrar de monitorar as amostras à medida que elas se descelularizam, pois as amostras podem variar de lote para lote, o que pode resultar em diferentes tempos de limpeza. Após este procedimento, outros métodos, como desquantificação ou testes mecânicos, podem ser aplicados para responder a perguntas adicionais, como até que ponto as amostras são limpas e com quais outros tecidos as amostras são mecanicamente semelhantes. Após seu desenvolvimento, essa técnica ajudou a pavimentar o caminho para pesquisadores no campo da engenharia de tecidos fabricarem andaimes perfusíveis.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como descelularizar tecidos vegetais para uso como andaimes. Não se esqueça de que trabalhar com detergentes e vapores de alvejante pode ser perigoso e precauções como usar equipamentos de proteção adequados e usar um exaustor devem sempre ser tomadas durante a execução desses procedimentos.