Rastreamento de expressão gênica, através da detecção de atividade de β-galactosidase em embriões de rato inteiro
June 26th, 2018
Aqui descrevemos o protocolo padrão para a detecção de atividade de β-galactosidase em embriões adiantados do rato inteiro e o método de parafina seccionamento e counterstaining. Este é um procedimento fácil e rápido para monitorar a expressão gênica durante o desenvolvimento, o que também pode ser aplicado às secções de tecidos, órgãos ou células cultivadas.
Este método pode responder a questões-chave no campo da biologia do desenvolvimento, como o estudo dos padrões de expressão gênica durante o desenvolvimento embrionário. As principais vantagens desta técnica são que ela é altamente sensível, fácil e rápida de executar e permite a visualização direta da coloração em todo o tecido de montagem ou em maior resolução após a secção da amostra em parafina. Demonstrando o procedimento estarão a Dra. Maria Jose Blanco, a Dra. Anabel Learte, a Dra. Emma Munoz e o Dr. Miguel Marchena.Todos eles são pós-doutorados seniores do meu laboratório. Comece incubando embriões transgênicos fixados em glutaraldeído expressando galactosidase em tampão de enxágue X-gal recém-preparado por 10 minutos em temperatura ambiente. Use embriões feitos de cama do tipo selvagem como controles negativos para a reação enzimática. Em seguida, substitua o tampão de enxágue por uma solução de coloração X-gal em pH 8-9.Proteja da luz e incube por 2 horas a uma noite a 37
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Visão Geral
Este artigo descreve um protocolo padrão para detectar atividade de β-galactosidase em embriões inteiros de camundongos precoces. O método é simples e pode ser aplicado a várias amostras biológicas, incluindo secções de tecidos e células cultivadas.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia do Desenvolvimento
- Expressão Gênica
Fundamentos
- β-galactosidase é um gene reporter comumente utilizado.
- Monitorar a expressão gênica é crucial durante o desenvolvimento embrionário.
- O protocolo permite uma fácil visualização da atividade gênica.
- Pode ser adaptado para diferentes contextos biológicos.
Objetivo do Estudo
- Fornecer um método confiável para detectar expressão gênica.
- Facilitar pesquisas em biologia do desenvolvimento.
- Aprimorar a compreensão dos processos de desenvolvimento embrionário.
Métodos Utilizados
- Detecção de atividade de β-galactosidase.
- Secionamento de embriões em parafina.
- Técnicas de contra-coloração para visualização.
- Aplicação a vários tipos de tecidos.
Principais Resultados
- Detecção bem-sucedida de β-galactosidase em embriões de camundongos.
- Demonstrada aplicabilidade a diferentes amostras biológicas.
- Forneceu um protocolo rápido e eficiente para pesquisadores.
- Aprimoramento do monitoramento da expressão gênica durante o desenvolvimento.
Conclusões
- O protocolo é eficaz para estudar a expressão gênica.
- Pode ser utilizado em vários ambientes de pesquisa.
- Contribui para avanços na pesquisa em biologia do desenvolvimento.
Perguntas Frequentes
Chapters in this video
0:04
Title
0:49
β-galactosidase Histochemistry of Whole Mount Mouse Embryos
2:23
Paraffin Embedding of X-gal Stained Embryos
4:37
Paraffin Sectioning
5:44
Deparaffinization and Counterstaining
6:56
Results: X-gal Staining of E9.5 WT and Mt4-mmpLacZ/ Whole-mount Embryos and Tissue Sections
7:52
Conclusion
