Explorando o potencial das células-tronco mesenquimais folha sobre o desenvolvimento do Carcinoma hepatocelular na Vivo

Olá, sou o Dr. Alaa Alshareeda, do Centro Internacional de Pesquisa Médica Rei Abdullah do Departamento de Células-Tronco e Medicina Regenerativa. Hoje estaremos demonstrando o efeito das células-tronco mesenquimais no desenvolvimento de carcinoma hepatocelular em modelo de rato usando a tecnologia de folha de células. Olá, sou Abdullah Almubarak.

Estou trabalhando em Cirurgia Experimental e Laboratório Animal na Universidade King Saud. Usamos o rato nu para evitar rejeições após o transplante da folha de células. Este diagrama mostra o procedimento de transplante de folha celular em ratos nus.

Ratos nus de oito a 12 semanas de idade serão usados neste estudo. Primeiro, corte os ratos e faça um corte de sete a dez centímetros entre a pele e os músculos subjacentes usando bisturi para expor o fígado. Para transferir a folha de células, use uma membrana estéril.

Coloque a membrana sobre a folha de células para coletá-la. Em seguida, coloque a folha de células com a membrana sobre um lobo do fígado. Construção da folha de célula.

Antes de semear as células, cubra placas de cultura UpCell responsivas à temperatura de 3,5 centímetros com FBS não diluído. O revestimento de placas com FBS suporta o crescimento das células na camada de membrana e evita a degradação das células. Certifique-se de cobrir toda a superfície da louça.

Incube os pratos por 24 horas a 37 graus Celsius em uma atmosfera umidificada contendo 5% de dióxido de carbono e 95% de ar. No dia seguinte, retire o excesso de FBS e deixe a loiça secar à temperatura ambiente durante pelo menos uma hora. Semeie pelo menos um milhão de células cancerígenas HepG2 isoladas ou co-cultivadas com células-tronco mesenquimais em meio de cultura DMEM.

O meio suplementado com 10% de FBS e 1% de penicilina-estreptomicina. A proporção usada de células cancerígenas para células-tronco mesenquimais neste estudo é de 4:1. Depois de adicionar as células, agite suavemente os pratos.

Incube as células a 37 graus Celsius em uma atmosfera umidificada contendo 5% de dióxido de carbono e 95% de ar. Descolamento da folha de célula. A 100% de confluência celular, retire os pratos da incubadora de 37 graus Celsius.

Agora, incube a folha de células cancerígenas HepG2 por uma hora em temperatura ambiente, enquanto incuba a HepG2 co-cultivada com células-tronco mesenquimais por 30 a 40 minutos a 20 Celsius em uma atmosfera umidificada contendo 5% de dióxido de carbono a 95% de ar. Durante o tempo de incubação para o desprendimento da folha de células, inicie o procedimento animal. Todos os estudos em animais foram aprovados pelo comitê de ética da Universidade King Saud

Realização do procedimento cirúrgico. Verifique a profundidade da anestesia testando o reflexo de retirada do pedal. Desinfete a área de cirurgia com iodo.

Agora, aplique um segundo esfoliante com iodo. Cubra o animal com uma cortina esterilizada para evitar a contaminação da incisão. Usando um bisturi esterilizado, faça um corte entre a pele e os músculos subjacentes, com cerca de sete a dez centímetros de tamanho para expor o fígado.

Separe o músculo abdominal da pele com a borda traseira plana do bisturi. Esfaqueie cuidadosamente a linha alba com um bisturi e estenda o corte com uma tesoura afiada. Transplante de folha celular em fígado de rato.

Bata suavemente a placa de cultura sobre a bancada para separar a folha de sua superfície. Separe a folha de células da superfície do prato raspando as bordas da folha em um semicírculo. Agora, remova delicadamente todo o meio de cultura do prato.

Certifique-se de que a folha esteja intacta sem danos, caso contrário, ela não poderá ser usada. Prepare uma membrana estéril para colher e transferir a folha de células. Então, primeiro, molhe a membrana com solução salina normal e, em seguida, remova o excesso de solução salina com um cotonete estéril.

Coloque a membrana úmida sobre a folha de células, evitando bolhas de ar entre a membrana e a folha de células. Adicione algumas gotas de solução salina normal sobre a membrana e a folha de células para coletar o material. Deixe a membrana por alguns segundos para garantir que a folha de célula esteja devidamente presa à membrana e, em seguida, colete-a.

Agora, prepare o fígado para o transplante. Certifique-se de que a superfície do fígado esteja seca. Coloque a membrana com a folha de células sobre um único lobo do fígado do rato.

Adicione algumas gotas de solução salina esterilizada para separar a folha de células da membrana. Aguarde cinco minutos antes de remover cuidadosamente a membrana. A folha de células pode ser vista anexada no fígado neste vídeo.

Finalmente, feche os músculos subjacentes e as incisões na pele com cinco suturas de náilon. Após fechar a incisão, desinfete a área da cirurgia com betadine. O tempo entre o desligamento do anestésico e a cabeça levantada é variável, mas geralmente fica entre cinco e 20 minutos.

Esta figura mostra o tumor desenvolvido no fígado de ratos após um mês de transplante de folha de células HepG2. Aqui, o tumor foi desenvolvido após o transplante de células cancerígenas HepG2 fabricadas em folha celular e células-tronco mesenquimais da medula óssea. Considerando que este mostra, o menor tumor desenvolvido no fígado de rato após o transplante de folha de células fabricada a partir de células cancerígenas HepG2 e células-tronco mesenquimais do cordão umbilical, Esta figura mostra a coloração H e E do fígado de rato após um mês do transplante de folha de células.

Onde A representa células normais do fígado de rato e B mostra células hepáticas de rato com câncer. Conclusão. Então, depois de assistir a este vídeo, você deve ser capaz de desenvolver um modelo de carcinoma hepatocelular em rato nu usando a tecnologia de folha de células. Obrigado por assistir.