Medição de alto rendimento da membrana plasmática, efectuou a eficiência em células de mamíferos

Este ensaio foi desenvolvido para abordar questões-chave no campo da biologia da membrana plasmática e para estabelecer como as células danificadas eficientemente podem resear sua membrana plasmática. Esta técnica pode ser usada para medir a eficiência da resseção da membrana plasmática em uma capacidade de alto rendimento e para identificar proteínas específicas e caminhos correspondentes que mediam o resealing da membrana plasmática. Comece adicionando 20 mililitros de uma pipeta sorológica de 2,5 vezes a 5 vezes por mililitro de suspensão média de crescimento em uma bacia de pipeta estéril e use uma pipeta sorológica de 10 mililitros para misturar completamente as células.

Em seguida, use uma micropipette multicanal para semear 100 microliters de células por poço em triplicado em uma placa tratada de tecido de poliestireno preto de 96 poços. Lembre-se que uma distribuição celular homogênea é a chave para um experimento bem sucedido, pois comparações entre todas as condições experimentais requerem contagem de células equivalentes. Após 24 horas na incubadora de cultura celular umidificada a 37 graus Celsius e 5%CO2, pré-aquece o leitor de placas a 37 graus Celsius e define a configuração óptica para monocromático, o modo de leitura para fluorescência, e o tipo de leitura para cinética.