Ensaio de reparação da membrana celular usando um microscópio de dois fotões Laser

O objetivo geral deste procedimento é quantificar a reparabilidade da membrana plasmática em células de pacientes com distrofia muscular. Este método pode ajudar a responder a questões-chave na distrofia muscular, como qual é a relação entre uma determinada mutação e a cinética de resselamento da membrana. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite a quantificação em tempo real da cinética de resselamento da membrana em células vivas.

Comece cultivando células de fibroblastos em um frasco T225 contendo 40 mililitros de meio de crescimento em uma incubadora de dióxido de carbono a 37 graus Celsius. Quando a cultura atingir 70 a 80% de confluência, enxágue as células duas vezes com 40 mililitros de PBS por lavagem, seguido da adição de cinco mililitros de 0,05% de tripsina por cinco minutos a 37 graus Celsius. Quando as células se separarem, pare a reação com 40 mililitros de meio de crescimento fresco e semeie dois mililitros de células a uma concentração de 100.000 células por mililitro em placas de fundo de vidro revestidas de colágeno de 35 milímetros para uma incubação noturna a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono.