Amostragem e Análise de Sinais de Aroma Animal

Desenvolvemos uma metodologia eficaz para amostragem e análise de sinais de odor, a fim de entender como eles podem ser usados na comunicação animal. Particularmente, usamos microextração de fase sólida do headspace, juntamente com espectrometria de massa cromatografia gasosa para analisar os componentes voláteis de odores animais e marcas de odor.

O papel desempenhado pelo odor na comunicação animal é atualmente subestimado e tão subestudado. Em particular, muito pouco se sabe sobre as mudanças químicas que sustentam os sinais olfativos em animais, incluindo humanos. E isso se deve também aos desafios metodológicos, registrando e quantificando compostos químicos de odores usados pelos animais para se comunicar.

Existem vários desafios potenciais ao trabalhar com misturas químicas altamente complexas e estes incluem também na amostragem e análise das amostras de odor. Estamos conduzindo a análise dos odores usados pelos animais para entender como eles podem ser usados por eles quando se comunicam entre si. Combinamos citoquímica com endocrinologia bioecologia e citologia para melhorar nossa compreensão do papel desempenhado pelo odor na comunicação animal.

Para nossa metodologia atual em Wolverhampton, adotamos a técnica de microestrutura de fase sólida do Headspace aliada à espectrometria de massa cromatografia a gás, construída e uma metodologia invisível da metodologia são utilizadas no passado. Os odores amostrais são coletados de uma das seguintes maneiras. Um, amostras liberadas espontaneamente de sujeitos habituados do estudo.

Por exemplo, primatas do zoológico coletam secreções de odor de glândulas odor por marcação de perfume em papel filtro estéril ou amostras de urina diretamente em frascos. Dois, após o treinamento, os sujeitos do estudo usando reforço positivo coletam secreções de odor esfregando olhar de odor com cotonetes de algodão estéreis. Três, após a sedação dos sujeitos do estudo, coletam secreções de odor esfregando glândulas odor com cotonetes estéreis de algodão, por amostras em parafusos estéreis de 10 mililitros tampados, frascos de vidro transparente e vedação com tampas de rosca incorporando o setor de silicone P T F E.

Armazene imediatamente os frascos a menos 20 graus Celsius. Note que é vital que equipamentos de proteção pessoal limpos, como luvas de nitrito, seja usado durante a amostragem. As luvas de mudança frequentemente evitam o contato direto da pele com amostras e frascos.

É preferível usar frascos novos. No entanto, no caso de frascos usados, é vital pré-limpar os frascos e, em seguida, usar o mesmo protocolo. Leve espaços em branco ambientais toda vez que marcas de perfume forem coletadas.

Faça isso expondo um papel filtro nãousado ou cotonete de algodão e frascos ao ambiente enquanto a amostragem é realizada. As amostras são preparadas no campo. Para um papel filtro marcado por perfume, corte um quadrado aproximado de 10 milímetros do papel e coloque em um frasco de espaço de cabeça de 10 mililitros.

Para um cotonete, corte a cabeça do cotonete na extremidade do eixo do cotonete e coloque em um frasco de espaço para a cabeça. Depois de preparado cada amostra, descarte ou limpe o uso da lâmina para cortar a mídia de amostragem, com um lenço antibacteriano apropriado e ou álcool e seque completamente. Armazene todas as amostras a menos 20 graus celsius.

Note que as amostras devem ser armazenadas a menos 20 graus celsius, no entanto, na loja de campo na temperatura mais baixa é possível a temperatura e transferir para menos 20 graus Celsius na primeira oportunidade. Antes da análise, remova amostras do congelador e possa andar naturalmente à temperatura ambiente por pelo menos uma hora. Configurar os métodos analíticos na GCMS da seguinte forma para as condições de análise de SPMS seguem as instruções do fabricante para condicionar as fibras SBME antes do primeiro uso.

É vital que o conjunto SBME esteja corretamente instalado no amostrador automático e que esteja alinhado à unidade de condicionamento de fibras do sampler automático e à porta de entrada GC. O alinhamento incorreto pode resultar em danos ou destruição da fibra Sbme. Certifique-se de que o fornecimento de gás de poleiro para a unidade de condicionamento de fibras esteja ligado.

Para melhorar a consistência do tempo de retenção da amostra, o método analítico é o tempo de retenção bloqueado adicionar os frascos de amostragem à bandeja do amostrador automático colocar um frasco vazio de espaço da cabeça para agir como um sistema em branco na primeira posição da bandeja de amostrador automático. Coloque o vazio ambiental na segunda posição e, em seguida, coloque todas as amostras restantes para análise nas posições subsequentes da bandeja do amostrador automático. Crie uma sequência analítica para analisar cada amostra dentro da bandeja de amostras.

Na tela inicial do caçador de massa, selecione sequência para a barra de menu e, em seguida, carregue a sequência do menu suspenso. Uma tabela de sequência em branco será exibida completando a tabela de sequência para todos os espaços em branco e amostras inserindo as informações apropriadas salvo como tabela de sequência concluída. Note que as informações exatas para a tabela de sequência dependerão da formatação laboratorial da tabela.

As informações mínimas normalmente incluem o nome da amostra do tipo de amostra, o local do arquivo e o método analítico numépria e a localização do arquivo de dados e a alocação de nome de um nome de arquivo de dados que corresponde ao nome da amostra envelhecendo o processamento de dados futuros. Amostras adicionais podem ser adicionadas à sequência durante a análise. Execute a sequência selecionando sequência na barra de menu e, em seguida, execute a sequência.

Após análise, devolveu amostras ao congelador o mais rápido possível. Note que pode ser possível reanalisar amostras. Mas deve-se notar que alguns componentes voláteis podem ter sido totalmente extraídos durante a análise inicial e algum composto pode ter sofrido decomposição térmica e bacteriana a 40 graus Celsius.

Assim, o resultado em cromatograma pode não ser completamente representativo da marcação original do perfume. A análise inicial dos dados inclui a integração de cromatógrafos para obter dados de tempo de retenção e área de pico, juntamente com a identificação provisória de picos usando software de estação de cam e bancos de dados espectrais de massa de ninhos. A análise dos dados pode ser realizada manualmente ou através de um método semi-automatizado.

Se o método semi-automatizado for usado, às vezes é benéfico realizar um grau de análise manual de dados para verificar identificações provisórias. Para iniciar a análise de dados abra o arquivo de dados clicando no arquivo apropriado na barra de navegação à esquerda. O TIC de cromatograma de íon total será exibido na janela superior da tela de análise de dados.

Para integrar o TIC usando o integrador RTE, primeiro selecione cromatograma na barra de menu e selecione o integrador no menu suspenso que uma caixa pop up abre e escolha o integrador RTE. Volte para o menu cromatograma e agora selecione integrar. Para ajustar os parâmetros de integração para que os picos ou até mais de três vezes o ruído da linha de base sejam integrados, selecione novamente o cromatógrafo na barra de menu e, em seguida, os parâmetros de integração do MS Signal do menu suspenso.

Na caixa pop up, ajuste a área mínima de pico conforme apropriado 1.0 produz resultados aceitáveis em nossos exemplos. Para identificar picos e gerar um relatório de resumo, selecione relatórios de exportação na barra de menu e, em seguida, relatório de resultados de pesquisa de biblioteca para XLS. Note que as bibliotecas espectrais a serem pesquisadas juntamente com o número de correspondências de biblioteca a serem exibidas precisam ser predefinidas dentro do software antes que uma pesquisa na biblioteca possa ser realizada.

O relatório de planilha resultante contém dados de integração para cada pico e uma tentativa de correspondência de biblioteca espectral para atribuir identidade. Normalmente, a qualidade da biblioteca ou a correspondência da biblioteca devem ser maiores que 80 para aceitar a identificação provisória. Salve a planilha.

Para identificar um pico diretamente do TIC, escolha o pico de interesse. Se o pico for um pequeno zoom, desenhando uma caixa ao redor do pico, segurando o botão do mouse à esquerda para baixo, estique a caixa sobre o pico e solte o botão do mouse. Coloque a linha do cursor para que ela esteja no ponto mais alto do pico ou logo depois.

Clique duas vezes, o botão do mouse da mão direita e o espectro de massa para o pico aparecerão na janela baixa da tela de análise de dados. Para pesquisar em uma biblioteca espectral, mova o cursor em qualquer lugar da janela espectral e clique duas vezes no botão do mouse da mão direita, os resultados de pesquisa da biblioteca aparecerão em uma nova janela. Para remover o ruído de fundo de um espectro de interesse primeiro, clique duas vezes no botão do mouse da mão direita no pico em questão e clique no botão do mouse da mão direita em uma área sem picos imediatamente em frente ao pico de interesse clique no botão subtraído na fita do menu ou selecione cromatógrafo para a barra de menu e, em seguida, subtrair espectros do menu suspenso.

O espectro subtraído será exibido na janela inferior da tela de análise de dados e exibirá um painel ao lado dos dados de varredura no cabeçalho da janela. Seguindo este protocolo, identificamos provisoriamente um total de 32 compostos químicos voláteis a partir da análise de 14 marcas de odor genital liberadas espontaneamente em papel filtro por lêmures vermelhos e comparamos perfis de odor com características do sinalador que ocorrem naturalmente compostos voláteis como hidrocarbonetos, terpenos, álcoois turpin e cetonas estavam presentes dentro desses perfis e incluem os compostos que haviam sido encontrados anteriormente para agir como hormônios sexuais e sinais de aptidão. em outras espécies animais. Os compostos que foram identificados provisoriamente estão listados na tabela um.

Cromatógrafos representativos um de um controle e outro de uma marca de perfume lima são mostrados na figura um. O número e a abundância relativa dos componentes variaram de amostra para amostra em diferentes sujeitos do estudo. No entanto, seis compostos rotulados de A a F no cromatógrafo estavam presentes em todas as amostras.

Estes compostos foram, respectivamente, curvas para a altura para a ilha de E um paracrystal hexanal seis paramentha dois oito corantes um dois pinene quatro e pentodecano. Os resultados deste estudo sugeriram que os lêmures-de-babados vermelhos usam marcação enviada para transmitir informações sobre sexo e idade feminina sem marcação genital desempenhando um papel na comunicação sociosexual. Outro resultado representativo após o uso deste protocolo foi o nosso estudo da propaganda de fertilidade por babuínos de oliva femininos.

Identificamos um total de 74 compostos voláteis a partir da análise de 395 amostras de odor vaginal babuíno feminino. Estes incluíam uma gama de compostos voláteis odorosos de ocorrência natural, como cetonas, álcoois, aldeídos, terpenos, ácidos graxos voláteis e hidrocarbonetos. Cromatógramas típicos usados para comparar trolls em branco e amostras de odor vaginal babuíno fêmea de períodos férteis e não férteis são mostrados na figura dois.

Examinamos as relações entre perfis de odor vaginal e receptividade sexual de babuínos fêmeas. Nossos resultados mostraram que a quantidade total de odor vaginal difere da fertilidade sugerindo que o odor pode desempenhar um papel na sinalização da fertilidade babuína feminina. Também encontramos diferenças no odor vaginal entre os tipos de grupo, mas não conseguimos distinguir os efeitos da composição do grupo, a imparidade da idade feminina.

São as vantagens combinadas da amostragem e uso da GCMS. Assim, o uso da micro extração de fase sólida do espaço da cabeça permite que uma ampla gama de amostras diferentes seja analisada usando GCMS. Somos capazes de separar os componentes dessas marcas complexas e, em seguida, identificar cada um desses componentes individuais usando o espectrômetro de massa.

E então, então toda a técnica combinada é muito poderosa e nos dá muitas informações sobre essas marcas de perfume, que no passado teria havido muita extração de preparação de amostra necessária para ser capaz de obter os resultados.