Name: Quantificação de glicose de Bergmeyer para amostras microbiológicas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Aprenda o método de Bergmeyer para quantificar glicose em amostras microbiológicas com alta precisão. Esta técnica enzimática espectrofotométrica melhora a especificidade e sensibilidade na detecção de concentrações baixas.

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1. Preparação da solução
<ol>
	<li>Prepare 100 mL de tampão fosfato 0,1 M. Pesar 1,28 g de di-hidrogenofosfato de potássio (KH2PO4) e 0,1304 g de fosfato dipotássico (K2HPO4) e adicioná-los a um copo de vidro. Agora, adicione 70 mL de água deionizada (H2Odi) e ajuste o pH para 5,5 usando ácido clorídrico (HCl) 1 M ou hidróxido de potássio (KOH). Transferir a solução para um balão volumétrico e ajustar o volume final para 100 ml. Em seguida, transfira a solução para um recipiente âmbar e armazene a solução a 4-8 °C por até 3 meses. CUIDADO: Use luvas de nitrilo durante todo o processo de preparação para evitar contato com a pele e possível contaminação, pois o dicloridrato de o-dianisidina é potencialmente cancerígeno.</li>
	<li>Prepare uma solução a 1% p / v de dicloridrato de o-dianisidina. Pesar 0,01 g de dicloridrato de o-dianisidina e colocá-lo em um tubo de centrífuga de 2,0 mL. Usando uma micropipeta de 1.000 mL, adicione 1,0 mL de H2Odi para dissolver o composto e, em seguida, misture lentamente pipetando para cima e para baixo. Proteja a solução da luz envolvendo o recipiente em papel alumínio e armazene-o a -20 ° C para manter a estabilidade. NOTA: Para facilitar o suporte do tubo durante a medição na balança analítica, um béquer de 10 mL pode ser usado como suporte adicional. Isso ajuda a estabilizar o tubo, garantindo uma medição precisa, minimizando o risco de deslocamento ou inclinação que pode alterar os resultados obtidos na balança.</li>
	<li>Em um balão volumétrico de 100 mL, adicione 10 mL de solução tampão fosfato seguida de 1 mL da solução de dicloridrato de o-dianisidina a 1% v/v. Em seguida, ajuste o volume final para 100 mL com tampão fosfato para obter uma concentração final de 0,01% de mistura de tampão o-dianisidina. Transfira a solução para um frasco âmbar e envolva-o com papel alumínio para protegê-lo da luz. Conservar a solução a 4-8 °C durante um período máximo de 3-4 meses. NOTA: A refrigeração é essencial para evitar a decomposição, o que pode comprometer a integridade das medições experimentais. Para evitar a degradação da mistura de tampão o-dianisidina, uma pequena porção de 13 mL (suficiente para 12 amostras) pode ser colocada em um tubo plástico de 14 mL no gelo até o uso.</li>
	<li>Prepare a solução 50% H2SO4 . Colocar um balão volumétrico de 100 ml com 30 ml de H2Odi num banho de gelo e deixar arrefecer durante 10 min. Em seguida, despeje lentamente 51 mL de H2SO4 (98% v / v) nas paredes do frasco, agitando cuidadosamente para homogeneizar a solução. Espere a mistura esfriar, pois a reação é exotérmica (gera calor). Ajustar o volume final para 100 ml com H2Odi e transferir a solução para um balão de vidro âmbar. NOTA: Use um exaustor e siga todos os protocolos de segurança, certifique-se de usar equipamento de proteção adequado. Prepare 50 mL de solução de carbonato de cálcio a 40% para neutralizar possíveis derramamentos que possam ocorrer.</li>
	<li>Preparar 50 mM de solução de acetato de sódio dissolvendo 0,04 g de acetato de sódio em 5 ml de H2Odi num copo. Ajuste o pH para 5,1 usando ácido acético glacial. Por fim, ajuste o volume para 10 mL com H2Odi.</li>
</ol>
2. Preparação de enzimas
<ol>
	<li>Em um microtubo estéril de 2,0 mL, pesar 0,01 g de glicose oxidase e misturar com 1 mL de acetato de sódio 50 mM, pH 5,0, para obter uma concentração final de 10 mg / mL. Cubra o tubo com papel alumínio e armazene a -20 °C. NOTA: A solução pode ser conservada até 2 meses a -20 °C.</li>
	<li>Calcule o volume de solução enzimática V2 necessário para atingir a atividade enzimática desejada em cada cubeta plástica (com um volume total de 1,5 mL) usando Eq (1): V1C1 = V2C2, onde V1 é 1.500 μL, C1 é 28,5 U de atividade enzimática e C2 (a concentração da solução enzimática) é 12.970 U / mL (10 mg da enzima [129.000 unidades / g] em 1 mL de H2Odi). V2 = (1.500 μL × 28,5 U)/12.970 U = 3,29 μL (1) NOTA: Para uma pipetagem mais precisa, o valor pode ser arredondado para 3.3 μL.</li>
	<li>Em um novo microtubo de 2 mL, pesar 0,0031 g de enzima peroxidase e adicionar 1 mL de tampão fosfato, pH 5,5, para atingir uma concentração final de 3,1 mg/mL. Cubra o microtubo com papel alumínio e armazene a -20 °C.</li>
	<li>Calcular o volume da solução de peroxidase necessário para atingir a actividade enzimática desejada por cubeta utilizando a Eq (1). Comece com um volume total de cubeta de 1.500 μL e uma atividade enzimática alvo de 1,25 U. Em seguida, determinar o volume necessário da solução enzimática, dada a sua concentração de 1,551 U. V2 = (1.500 μL × 1,25 U)/1.551 U = 1,208 μL NOTA: Para uma pipetagem mais precisa, o valor foi arredondado para 1,20 μL.</li>
</ol>
3. Padrão de glicose
<ol>
	<li>Preparar um padrão de D-glicose de 1 g/L adicionando 0,01 g de D-glicose a 10 ml de H2Odi num balão volumétrico. Para diluir a concentração para 0,5 g/L, pegue 500 μL da solução estoque e misture com 500 μL de H2Odi para obter um volume final de 1 mL. NOTA: Este processo de diluição é essencial para criar soluções padrão precisas.</li>
</ol>
4. Preparação da curva padrão
<ol>
	<li>Usando um novo microtubo de 2 mL, adicione o tampão e os volumes de glicose indicados na Tabela 1.</li>
	<li>Ajuste o banho térmico seco para 37 °C. Quando a temperatura estiver estável, adicione 3,3 μL de glicose oxidase a todos os tubos e, em seguida, adicione 1,2 μL de peroxidase a cada tubo. Incubar os tubos a 37 °C durante 20 min.</li>
	<li>Após a incubação, adicione imediatamente 750 μL de 50% H2SO4 (v/v) a cada microtubo e deixe a mistura esfriar em banho de gelo por 2 min. Isso resulta em um volume final de 1.500 μL. Por fim, transferir a solução para uma cubeta de plástico e medir a absorvância a 529 nm.</li>
</ol>
Tabela 1: Curva de calibração de glicose para o método GOX-H2SO4 . Abreviaturas: GOD = glicose oxidase; DPO = peroxidase; H2SO4 = ácido sulfúrico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67126/67126_Table%201.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
5. Testando amostras microbiológicas
<ol>
	<li>Obtenha a amostra cultivando bactérias ou leveduras em um meio de cultura líquido sob condições específicas, incluindo temperatura, velocidade de agitação e tempo de incubação. Quando a cultura atingir a densidade óptica (DO) ou concentração celular desejada, colete a cultura para processamento posterior. NOTA: Pseudomonas reptilivora foi cultivada a uma velocidade de agitação constante de 300 rpm e 28 °C, enquanto Debaryomyces hansenii foi cultivada com uma velocidade de agitação de 200 rpm a 30 °C em um agitador orbital. No caso específico de D. hansenii, o óleo de canola comestível também foi utilizado como indutor para a produção de lipase.</li>
	<li>Limpe a área de trabalho com uma solução de álcool a 70% ou um agente de limpeza adequado de acordo com os protocolos de biossegurança. Acenda um queimador para garantir assepsia.</li>
	<li>Transfira 100 μL do meio de cultura para um microtubo de 1,5 mL ou 2 mL usando pontas estéreis.</li>
	<li>Centrifugar as amostras a 7.500 × g durante 7 min a 4 °C ou a 10.000 × g durante 7 min sem controlo de temperatura. Após a centrifugação, remova cuidadosamente o sobrenadante, que contém glicose em solução, e descarte o pellet.</li>
	<li>Use 0,5 μL do sobrenadante para concentrações de glicose variando de 1 a 20 g / L e, em seguida, misture com 749,5 μL de tampão o-dianisidina, 3,3 μL de GOD e 1,2 μL de POD. Incube os microtubos por 20 min a 37 ° C, conforme detalhado na etapa 4.2 e adicione imediatamente 750 μL de 50% H2SO4 e deixe esfriar em banho de gelo por 2 min.<ol>
		<li>Para concentrações acima de 20 g/L, execute uma diluição de 1:1 com H2Odi estéril antes de prosseguir.</li>
		<li>Se as amostras sobrenadantes tiverem sido previamente congeladas a -80 °C ou -20 °C, descongelá-las à temperatura ambiente e vórtice durante 30 s antes da utilização. Se a diluição for necessária, use H2Odi estéril.</li>
		<li>Para amostras com concentrações de glicose superiores a 30 g/l, realizar uma diluição de 1:1 com H2Odi estéril, resultando em um fator de diluição de 2.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Calcule a concentração total de glicose em cada amostra usando a Eq (2) em um programa de planilha. 
	<img alt="Equation 11" src="/files/ftp_upload/67126/67126eq11.jpg" style="margin: auto;">(2) Onde: 
	x = concentração de glicose (g/L) δ = Volume final da reação (0,0015 L) 
	y = absorvância M.S. = quantidade de amostra utilizada* NOTA: Os valores b e m são da equação que modela a linha de tendência da curva de calibração para o método (y = mx + b). *O valor M.S. deve basear-se na quantidade de amostra utilizada para obter a proporção na diluição correspondente (ou seja, se tomar 0,5 μL do sobrenadante, M.S. = 0,0000005 L = 0,5 × 10-6 L); se for utilizado um factor de diluição (DF), multiplicar a absorvância obtida pelo DF. Por exemplo, se uma absorbância de 0,5 for obtida e um DF de 2 for usado, o resultado seria 1,0. Portanto, y = 1,0, e esse valor deve ser inserido na Eq (2), conforme descrito anteriormente.</li>
</ol>
6. Validação analítica
<ol>
	<li>Calcular os parâmetros de validação analítica do método GOX-H2SO4 de acordo com o estabelecido pelo Centro Nacional de Metrologia e pela Entidade Mexicana de Acreditação10 (CENAM-ema).<ol>
		<li>Calcule a precisão como uma porcentagem do coeficiente de variação ou %CV = (S/x) × 100, onde x é a média do grupo amostral e S é o desvio padrão com um valor de aceitação de ≤10%.</li>
		<li>Determine a linearidade ajustando a curva padrão ao modelo linear R2 acima de 0,995.</li>
		<li>Calcule o limite de quantificação (LOQ) usando a equação: LOQ = yB + 10sB, onde yB representa a concentração do analito que produz um sinal equivalente ao sinal alvo e 10sB denota 10x o desvio padrão do branco</li>
		<li>Calcule o erro sistemático usando esta equação: Inclinação = x - m, onde x = média da concentração experimental e m é a concentração teórica.</li>
		<li>Determine a precisão como o grau de concordância entre um valor real e um valor teórico. % de recuperação = (CR/CV) × 100 Onde CR é a média da concentração experimental e CV é o coeficiente de variação da concentração teórica.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
7. Interferência de outros açúcares redutores
<ol>
	<li>Avalie quatro açúcares redutores separadamente: glicose, frutose, galactose e xilose de uma solução estoque de 0,5 g / L. Além disso, use trealose como controle negativo. Seguir o protocolo para todas as amostras e medir a absorvância a 545 e 529 nm.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Quantificação enzimática de glicose de Bergmeyer para análise microbiana e de levedura

<ol><li>Huang, W. C., Tang, I. C. Bacterial and yeast cultures: process characteristics, products, and applications. Bioprocessing for value-added products from renewable resources. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHuang%2C+WC+%22New+Technologies+and+Applications%22">New Technologies and Applications</a>. , Elsevier. 185-223 (2007).</li>
<li>Hernandez-Lopez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+reducing+sugars+based+on+the+qualitative+technique+of+Benedict%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">Quantification of reducing sugars based on the qualitative technique of Benedict.</a> ACS Omega. 5 (50), 32403-32410 (2020).</li>
<li>Miller, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+dinitrosalicylic+acid+reagent+for+determination+of+reducing+sugar%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar.</a> Anal Chem. 31 (3), 426-428 (1959).</li>
<li>Deshavath, N. N., Mukherjee, G., Goud, V. V., Veeranki, V. D., Sastri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pitfalls+in+the+3%2C5-dinitrosalicylic+acid+%28DNS%29+assay+for+the+reducing+sugars%3A+interference+of+furfural+and+5-hydroxymethylfurfural%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">Pitfalls in the 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) assay for the reducing sugars: interference of furfural and 5-hydroxymethylfurfural.</a> Int J Biol Macromol. 156, 180-185 (2020).</li>
<li>De Abreu, J. R., Santos, C. D. D., De Abreu, C. M. P., Corrêa, A. D., De Oliveira Lima, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sugar+fractionation+and+pectin+content+during+the+ripening+of+guava+cv.+Pedro+Sato%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Sugar fractionation and pectin content during the ripening of guava cv. Pedro Sato.</a> Food Sci Technol. 32 (1), 156-162 (2020).</li>
<li>Dubois, M., Gilles, K. -A., Hamilton, J. K., Roberts, P. A., Smith, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+colorimetric+method+for+the+determination+of+sugars%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A colorimetric method for the determination of sugars.</a> Nature. 168 (4265), 167(1951).</li>
<li>Gonzalez, N. M., Fitch, A., Al-Bazi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+RP-HPLC+method+for+determination+of+glucose+in+Shewanella+oneidensis+cultures+utilizing+1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone+derivatization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Development of a RP-HPLC method for determination of glucose in Shewanella oneidensis cultures utilizing 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone derivatization.</a> PLoS ONE. 15 (3), e0229990(2020).</li>
<li>Galant, A. L., Kaufman, R. C., Wilson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose%3A+Detection+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Glucose: Detection and analysis.</a> Food Chem. 188, 149-160 (2015).</li>
<li>Bergmeyer, H. U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBergmeyer%2C+HU+%22Methods+of+enzymatic+analysis%22">Methods of enzymatic analysis</a>. 2, Elsevier Inc. (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Gu%C3%ADa+t%C3%A9cnica+sobre+trazabilidad+e+incertidumbre+en+las+mediciones+anal%C3%ADticas+que+emplea+la+t%C3%A9cnica+de+espectrofotometr%C3%ADa+de+ultravioleta-visible%22">Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplea la técnica de espectrofotometría de ultravioleta-visible</a>. , CENAM-EMA. (2008).</li>
<li>Yuen, V. G., McNeill, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+glucose+oxidase+method+for+glucose+determination+by+manual+assay+and+automated+analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of the glucose oxidase method for glucose determination by manual assay and automated analyzer.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 44 (3), 543-546 (2000).</li>
<li>Hansen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+of+glucose+oxidase+reaction+and+interference+with+quantitative+glucose+oxidase-peroxidase-O-dianisidine+method%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Investig%22%5BJournal%5D)">Specificity of glucose oxidase reaction and interference with quantitative glucose oxidase-peroxidase-O-dianisidine method.</a> Scand J Clin Lab Investig. 14 (6), 651-655 (1962).</li>
<li>Kumar, V., Gill, K. D. Estimation of blood glucose levels by glucose oxidase method. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKumar%2C+V+%22Basic+concepts+in+clinical+biochemistry%3A+A+practical+guide%22">Basic concepts in clinical biochemistry: A practical guide</a>. , Springer eBooks. 57-60 (2018).</li>
</ol>

A glicose serve como fonte primária de energia e carbono para vários microrganismos, incluindo bactérias, leveduras e fungos. Esses microrganismos absorvem a glicose por meio de transportadores localizados na membrana extracelular, onde ela sofre uma série de reações bioquímicas dentro da via metabólica da glicólise para ser convertida em piruvato1. Existem várias técnicas para a quantificação de açúcares redutores, como a glicose. Por exemplo, o reagente de Benedict2, o uso de ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS)3,4, o método da anthrona5 ou o ácido fenol-sulfúrico6 podem ser empregados. No entanto, esses métodos detectam qualquer açúcar redutor presente na amostra, como frutose e maltose, que pode contribuir para o sinal e complicar a quantificação precisa de um determinado açúcar.
Além disso, exigem um controle rigoroso da temperatura e o manuseio de substâncias perigosas, o que pode complicar o processo e afetar a precisão. Esses métodos também podem sofrer interferência de outros compostos presentes na amostra, dificultando a quantificação precisa da glicose. Por outro lado, a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) oferece uma alternativa mais precisa, permitindo a discriminação entre glicose e outros açúcares redutores, embora com custos operacionais mais elevados. Esses métodos contrastantes destacam a necessidade contínua de desenvolvimento de técnicas de quantificação de glicose precisas e econômicas7.
O método glicose oxidase-peroxidase-ácido sulfúrico (GOX-H2SO4) emprega duas enzimas, glicose oxidase (GOD) e peroxidase (POD). GOD é uma enzima oxidorredutase muito seletiva para a oxidação da β-D-glicose8. Este complexo atua como um catalisador durante a reação que ocorre quando a glicose está na presença de oxigênio, produzindo ácido glucônico e peróxido de hidrogênio (H2O2). O H2O2 é detectado por meio de um aceptor cromogênico de oxigênio, a o-dianisidina, que, ao interagir com o POD, causa sua oxidação e liberação de H2O2 , impedindo que o ácido glucônico seja convertido novamente em glicose (ver Figura 1). A cor obtida é estabilizada pela adição de ácido sulfúrico (H2SO4), que também interrompe a reação enzimática, evitando assim possíveis interferências que poderiam ocorrer se a reação continuar9.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67126/67126fig01.jpg"> 
Figura 1: Visão geral do método de quantificação da glicose usando a enzima glicose oxidase. que reage com a glicose para produzir peróxido de hidrogênio (H2O2) e ácido glucônico. Posteriormente, a enzima peroxidase reage com H2O2 na presença de dicloridrato de O-dianisidina. Na etapa final, o ácido sulfúrico (H2SO4) é adicionado para interromper a reação enzimática, resultando em uma cor rosa que é medida em 529 nm. Abreviaturas: POD = peroxidase; DEUS = glicose oxidase. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67126/67126fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
O método enzimático GOX-H2SO4 é uma técnica amplamente utilizada para medir a concentração de glicose em amostras biológicas, a maioria das quais são de interesse clínico. No entanto, poucos estudos investigaram uma técnica que permita quantificar a quantidade de glicose em um meio de crescimento para avaliar seu consumo. Portanto, no presente protocolo, é apresentada a metodologia para quantificar a glicose por meio da reação enzimática de glicose oxidase, peroxidase, dicloridrato de o-dianisidina e H2SO4 em amostras líquidas microbiológicas, que surge como uma modificação do trabalho realizado por Bergmeyer9, utilizando 50% (v/v) H2SO4 e quantidades menores de reagentes.

<table><tbody><tr><td>Microtubo de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Microtubo de 2,0 mL</td><td>Eppendorf</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>CaCO3</td><td>Meyer</td><td>471-34-1</td><td>Carbonato</td></tr><tr><td>de Cálcio D-Glicose</td><td>Meyer</td><td>50-99-7</td><td>D-Glicose&nbsp;</td></tr><tr><td>Drybath</td><td>FisherScientific</td><td>11-718-4</td><td>Série 911NO251. Bloco LxPxA mm/in: 124 x 76 x 39 / 4.9 x 3.0 x 1.5</td></tr><tr><td>Glicose oxidase&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G6125-50KU</td><td>Enzima em pó</td></tr><tr><td>H2O</td><td>-</td><td>-</td><td>Água deionizada</td></tr><tr><td>H2SO4</td><td>Meyer</td><td>7664-93-9</td><td>Ácido sulfúrico</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Meyer</td><td>7647-01-0</td><td>Ácido clorídrico&nbsp;</td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Meyer</td><td>7758-11-4</td><td>Fosfato dipotássico</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Meyer</td><td>7778-77-0</td><td>Fosfato monopotássico</td></tr><tr><td>KOH</td><td>Meyer</td><td>1310-58-3</td><td>Hidróxido de potássio</td></tr><tr><td>Lambda 35</td><td>PerkinMicrotubo de</td><td></td> <td>espectrofotômetro</td>Elmer</tr><tr><td> centrífuga</td><td>-</td><td></td><td>--</td></tr><tr><td>dicloridrato de dianisidina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D3252</td><td>Peroxidase Cromogênica</td></tr><tr><td></td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8125-50KU</td><td>Enzima em pó</td></tr><tr><td>pH-meter</td><td>Hanna&nbsp;</td><td>1131</td><td>Hanna 1170</td></tr><tr><td>Acetato de sódio</td><td>Meyer</td><td>127-09-3</td><td>Meyer</td></tr><tr><td>Espátulas de pesagem&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td></tr></tbody></table>

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Altamente sensível e rápido de detecção de fluorescência com um portátil FRET Analyzer

Aqui, descrevemos um ensaio colorimétrico para detectar a presença de açúcares redutores durante a germinação de esporos bacterianos.

Detecção de Cortex Fragmentos Durante bacteriana germinação de esporos

Os monócitos são componentes integrais do sistema imunológico inato humano que dependem do metabolismo glicolítico quando ativados. Descrevemos um protocolo de citometria de fluxo para medir a expressão do transportador de glicose e a captação de glicose por monócitos totais e subpopulações de monócitos em sangue total fresco.

A Fluxo Simples Citometria método para medir glicose Captação e expressão de transportadores de glicose para monócitos subpopulações em sangue total

Apresentamos um protocolo para identificação e quantitação das principais classes de metabólitos solúveis em água no levedura Saccharomyces cerevisiae. O método descrito é versátil, robusto e sensível. Permite a separação de isômeros estruturais e formas estereogômicas de metabólitos solúveis em água uns dos outros.

Metabolômica Quantitativa de Saccharomyces Cerevisiae Usando cromatografia líquida juntamente com espectrometria de massa tandem

Um protocolo é descrito para a preparação de um ecossistema modelo simples que recria o contragradiente metano-oxigênio encontrado no habitat natural de bactérias oxidantes aeróbicas de metano, permitindo o estudo de sua fisiologia em um contexto espacialmente resolvido. Modificações em ensaios bioquímicos comuns para uso com o ecossistema modelo baseado em agarose também são descritas.

Ecossistema modelo baseado em agarose para cultivo de metanotróficos em um gradiente de contador de metano-oxigênio

Aprenda o método de Bergmeyer para quantificar glicose em amostras microbiológicas com alta precisão. Esta técnica enzimática espectrofotométrica melhora a especificidade e sensibilidade na detecção de concentrações baixas.

Quantificação de glicose de Bergmeyer para amostras microbiológicas

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