Lavagem salina para amostragem do microambiente imunológico nasal canino

Estudamos as respostas imunes associadas à radioterapia e cães com tumores nasais. Estamos tentando entender como podemos melhorar os resultados dos pacientes com câncer para a radioterapia, modulando o sistema imunológico. Mudanças no microambiente imunológico podem ser importantes no estudo dos efeitos do tratamento. Portanto, é desejável analisar em série as células do microambiente. No entanto, pode ser um desafio coletar amostras dos tecidos da cavidade nasal com biópsias repetidas devido à anatomia complexa e à propensão da mucosa ao sangramento.

A técnica de lavagem nasal salina permite a amostragem seriada do microambiente imunológico da cavidade nasal com o mínimo de ruptura do tecido. Células e proteínas coletadas com a técnica de lavagem nasal podem ser analisadas com vários ensaios para investigar o estado do microambiente imunológico nasal ao longo do tempo.

Um dia antes do procedimento, encha as seringas de 520 mililitros com soro fisiológico estéril. Tampe bem as seringas e coloque-as em uma incubadora a 37 graus Celsius para aquecer durante a noite. Em seguida, posicione o cão anestesiado em decúbito externo na mesa de tratamento. Ajuste a cabeça do cão para ser inclinada para baixo, natural e confortavelmente fora da borda da mesa para facilitar a coleta ideal de amostras de lavagem nasal. Infle o manguito do tubo endotraqueal para garantir uma vedação firme das vias aéreas. Para a lavagem nasal, corte um cateter de borracha vermelha estéril de oito French na base para caber perfeitamente em uma das seringas pré-cheias de 20 mililitros contendo solução salina quente. Usando um marcador permanente, marque a extremidade da base do cateter para indicar o ponto inicial na entrada da narina. Confirme se o comprimento predeterminado se estende por via intranasal com a ponta posicionada no local desejado. Em seguida, corte a ponta do cateter para corresponder ao comprimento do cateter intranasal definido, garantindo que ele caia no local apropriado dentro da cavidade nasal. Para realizar o procedimento de lavagem nasal, designe uma pessoa para alimentar o cateter na cavidade nasal e administrá-lo, e a outra pessoa para coletar a amostra quando ela sair do nariz. Posicione uma pessoa na frente e abaixo da cabeça do cão, usando luvas. Guie suavemente o cateter de borracha vermelha para o aspecto medial da cavidade nasal até que a marca no cateter se alinhe com a entrada da narina. Simultaneamente, a outra pessoa segura um tubo cônico de 50 mililitros abaixo da narina com o cateter no lugar. Usando uma mão, oclua suavemente a narina contralateral. Comece a infundir a solução salina na cavidade nasal com pressão lenta e constante ou com uma infusão de pulso, mantendo a cabeça do cão em um ângulo para baixo. Colete o fluido de drenagem em um tubo cônico de 50 mililitros posicionado abaixo da narina. Após o procedimento, permita que o cão se recupere da anestesia, mantendo-o deitado externamente com a cabeça para baixo. Agora registre o volume total de fluido de lavagem nasal coletado em relação à quantidade total de solução salina infundida. Para processar a amostra, batexa ou pipeta suavemente as amostras de lavagem nasal dentro dos tubos cônicos para quebrar aglomerados de detritos e células. Passe as amostras agrupadas por um filtro de células de 70 micrômetros para remover grandes detritos no muco. Centrifugue as amostras filtradas a 300 G durante cinco a 10 minutos para formar um sedimento celular. Usando uma pipeta, aspire cuidadosamente o sobrenadante das amostras da centrífuga. Depositar o sobrenadante num tubo limpo para posterior análise das proteínas. Finalmente, ressuspenda os grânulos celulares em PBS ou na solução preferida para ensaios celulares de interesse.