Name: Identificação e classificação de variantes missense da subunidade do receptor GABAA específicas da posição para seu papel nos neurônios piramidais do hipocampo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Aprenda a identificar variantes missense do receptor GABA A em neurônios piramidais do hipocampo CA1. Este método multiescala ajuda pesquisadores a compreender mecanismos epilépticos e desenvolver estratégias terapêuticas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Brian2&nbsp;</td><td>Sorbonne Universit&eacute;, INSERM, CNRS, Institut de la Vision, França; Imperial College London, Reino Unido</td><td>2.8.0.4</td><td>Stimberg et al., 2019 (https://pypi.org/project/Brian2/)</td></tr><tr><td>servidor dbNSFP&nbsp; &nbsp;</td><td>Genos Bioinformatics LLC, EUA</td><td>v3.0</td><td>Liu et al., 2020 (http://database.liulab.science/dbNSFP) (https://sites.google.com/site/jpopgen/dbNSFP)</td></tr><tr><td>ESPERANÇA&nbsp; &nbsp;</td><td>Centro de Informática Molecular e Biomolecular CMBI, Universidade Radboud, Holanda&nbsp;</td><td>1.1.1</td><td>Venselaar et al., 2010 (https://www3.cmbi.umcn.nl/hope/)</td></tr><tr><td>Jalview&nbsp; &nbsp;</td><td>Universidade de Dundee, Reino Unido</td><td>JV2</td><td>Waterhouse et al., 2009 (https://www.jalview.org/)</td></tr><tr><td>Jupyter Notebook</td><td>Projeto Jupyter, EUA</td><td></td><td>https://jupyter.org/install&nbsp;</td></tr><tr><td>Phyton</td><td>Python Software Foundation, EUA</td><td>3.13</td><td>https://www.python.org/downloads/</td></tr><tr><td>Protter&nbsp; &nbsp;</td><td>ETH Zurique, Suíça</td><td>Versão 1.0</td><td>Omasits, et al., 2014 (https://wlab.ethz.ch/protter/start/)</td></tr><tr><td>R&nbsp;</td><td>Fundação R para Computação Estatística, EUA</td><td>R versão 4.3.2&nbsp;</td><td>&nbsp; https://www.r-project.org/&nbsp;</td></tr><tr><td>RStudio</td><td>Posit software, PBC, EUA</td><td>RStudio 2023.12.1+402 Lançamento "Ocean Storm"</td><td>https://posit.co/downloads/</td></tr></tbody></table>

identificação e classificação de variantes missense da subunidade do receptor gabaa específicas da posição para seu papel nos neurônios piramidais do hipocampo

Identification and Classification of Position-specific GABAA Receptor Subunit Missense Variants for Their Role In Hippocampal Pyramidal Neurons

Este estudo utiliza uma abordagem multiescala para prever e caracterizar as variantes patogênicas na subunidade γ2 do receptor GABAA , um componente chave na fisiopatologia da epilepsia. Por meio do uso de modelos preditivos, modelagem molecular, conservação evolutiva, exame estrutural, análise de correlação e simulações neurais, essa abordagem aprimora a classificação de variantes, com relevância significativa para a pesquisa de epilepsia e possivelmente para uso clínico. O re...

Identificação e classificação de variantes missense da subunidade do receptor GABAA específicas da posição para seu papel nos neurônios piramidais do hipocampo

Understanding the effects of functionally unknown variants in epilepsy associated genes is crucial for elucidating disease pathophysiology and developing ...

Nosso estudo é baseado na ideia de que mutações epileptogênicas e preditas proximais nas subunidades do receptor GABA-A podem afetar de forma semelhante o modelo de neurônio piramidal CA1. Exploramos isso por meio de uma estrutura multiescala. Experimentos de laboratório são essenciais para descobrir a verdade, mas não podem capturar totalmente a diversidade e complexidade da vida em todas as escalas, de moléculas a organismos. Existem muitas possibilidades, esse é o problema.Nosso protocolo e descobertas abriram caminho para um cenário computacional que pode ser usado para explorar o impacto de polimorfismos, como polimorfismos de subunidade do receptor GABA-A na função neural.Nosso estudo levanta novas questões sobre até que ponto as variantes patogênicas previstas e as mutações epileptogênicas mostram propriedades semelhantes e como essas relações podem ser efetivamente capturadas e simuladas.Nosso foco atual está na função do microcircuito córtex entorrinal-hipocampo. Buscaremos modelos animais in vivo e modelos computacionais de microcircuitos para explorar o controle septal neste circuito, especialmente em distúrbios neuropsiquiátricos.[Narrador] Para começar, abra o arquivo

identification-classification-position-specific-gabaa-receptor

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Neurônios são os primeiros caracterizada eletrofisiologicamente. Em seguida, o citoplasma do neurônio gravado é aspirado e submetido a transcrição reversa-PCR para detectar a expressão de mRNAs de enzimas neurotransmissor síntese, canais iônicos e receptores.

Perfil de tensão-gated Expressão mRNA canais de potássio em neurônios da substância negra usando uma única célula RT-PCR Técnicas

Aqui demonstramos a utilização do corante fluorescente Alexa acoplado a α-bungarotoxina para medir GABA A localização do receptor de superfície e endocitose em neurónios do hipocampo. Através da utilização de construções que ostentam uma marca curta extracelular que se liga α-bungarotoxina, análise de proteína da membrana plasmática do tráfico endocítica pode ser alcançado.

Usando um α-Bungarotoxina Binding Tag Site para Estudar GABA um receptor de membrana Localização e Tráfico

Redes corticais são controlados por um conjunto de pequenos, mas diversificada de interneurónios inibitórios. Investigação funcional dos interneurônios, portanto, requer a gravação específica e rigorosa identificação. Descrito aqui é uma abordagem conjunta, envolvendo gravações de células inteiras de pares simples ou synaptically acoplados de neurônios com rotulagem intracelular, post-hoc Análise morfológica e imunocitoquímica.

Whole-cell Recordings patch-clamp de Morphologically- e identificados Neuroquimicamente hipocampo Interneurônios

Os mecanismos moleculares que coordenam a formação de sinapses inibitórias GABAergic durante a ontogenia são em grande parte desconhecidos. Para estudar estes processos, temos desenvolvido um sistema modelo de co-cultura que incorpora embrionárias neurónios GABAérgicos espinhoso meio de cultura em conjunto com o rim embrionário humano 293 (HEK293) transfectadas estavelmente células que expressam receptores GABA A funcionais.

Formação Sinapse Inibitória em uma co-cultura-tipo que comportem GABAérgicos espinhosos médios neurônios e células HEK293 expressando estavelmente GABA A Receptores

Apreensão de electroconvulsive (ECS) é um modelo animal experimental de terapia eletroconvulsiva para depressão grave. ECS globalmente estimula a atividade no hipocampo, levando a sinaptogênese e plasticidade sináptica. Aqui, descrevemos os métodos para a indução de ECS em ratos e para fraccionamento subcelular de seu hipocampo para examinar alterações induzidas pelo ataque em proteínas sinápticas.

Eletroconvulsiva convulsões em ratos e fracionamento de seu hipocampo para examinar alterações induzidas pelo ataque em densidade pós-sináptica proteínas

Descrevemos a técnica de sopro, pelo qual reagentes farmacológicos podem ser administrados durante a gravação de células inteiras remendo-braçadeira e destacam vários aspectos dos recursos que são cruciais para seu sucesso.

Célula inteira correntes induzidas pela aplicação de Puff de GABA no cérebro fatias

Alvo da próxima geração sequenciamento é uma abordagem de tempo e custo-eficiente que está se tornando cada vez mais popular na pesquisa da doença e diagnóstico clínico. O protocolo descrito aqui apresenta o fluxo de trabalho complexo necessário para sequenciamento e bioinformática processo usado para identificar variantes genéticas que contribuem para a doença.

Sequenciamento de nova geração direcionado e fluxo de análises de bioinformática para avaliar determinantes genéticos de doenças constitucionais

Este protocolo descreve os passos críticos e as precauções necessárias para executar a única célula multiplex transcrição reversa reação em cadeia da polimerase após remendo-braçadeira. Esta técnica é um método simples e eficaz para analisar o perfil de expressão de um conjunto predeterminado de genes de uma única célula caracterizada por gravações de remendo-braçadeira.

Única célula transcrição reversa Multiplex cadeia da polimerase após Patch-clamp

Aqui, apresentamos os protocolos para descobrir compostos ativos nos receptores GABAA , partir de ligação para a fisiologia e farmacologia.

Métodos para a descoberta de novos compostos modulando um Receptor do ácido gama - aminobutírico tipo uma neurotransmissão

Excitabilidade neuronal pode ser modulada através de um processo dinâmico de endo e exocitose de geleificação excitatório glutamato receptores. Aqui descrito é um ensaio acessível, alto teor para quantificação de receptores de superfície e interno população piscinas.

Um ensaio de alto teor para monitoramento Leandro tráfico de Receptor

Aprenda a identificar variantes missense do receptor GABA A em neurônios piramidais do hipocampo CA1. Este método multiescala ajuda pesquisadores a compreender mecanismos epilépticos e desenvolver estratégias terapêuticas.

Identificação e classificação de variantes missense da subunidade do receptor GABAA específicas da posição para seu papel nos neurônios piramidais do hipocampo (Vídeo) | JoVE Journal

Identificação e classificação de variantes missense da subunidade do receptor GABA_A específicas da posição para seu papel nos neurônios piramidais do hipocampo

Explorar mais vídeos