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Extração de DNA micobacteriano usando batimento de grânulos em tampão personalizado seguido de fl...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Mycobacterial DNA Extraction using Bead Beating in Custom Buffer Followed by NGS Workflow

Extração de DNA micobacteriano usando batimento de grânulos em tampão personalizado seguido de fluxo de trabalho NGS

Full Text
1,093 Views
09:18 min
June 13, 2025

DOI: 10.3791/68037-v

Jason D. Limberis*1, Alina Nalyvayko*1, Janré Steyn2, Jennifer Williams2, Melanie Grobbelaar2, Robin M. Warren*2, John Z. Metcalfe*3

1Division of Experimental Medicine,University of California, San Francisco, 2DSI-NRF Centre of Excellence for Biomedical Tuberculosis Research, SAMRC for Tuberculosis Research, Division of Molecular Biology and Human Genetics, Faculty of Medicine and Health Sciences,Stellenbosch University, 3Division of Pulmonary and Critical Care Medicine, Zuckerberg San Francisco General Hospital and Trauma Centre,University of California, San Francisco

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Este protocolo mostra que o batimento de contas combinado com a purificação de esferas de captura de DNA fornece um método rápido e consistente para extrair DNA de amostras de Mycobacterium tuberculosis , tornando-o uma escolha eficaz para aplicações de sequenciamento de próxima geração.

Nossa pesquisa de diagnóstico se concentra em melhorar a detecção de resistência a medicamentos na tuberculose em ambientes de recursos limitados, com foco na velocidade e no pragmatismo. No diagnóstico de TB, existem ensaios genotípicos mais abrangentes e até mesmo uma série de novos ensaios fenotípicos rápidos, e há esforços consistentes para aproximar esses testes do ponto de atendimento. Mas ainda existem várias barreiras pragmáticas.

Os desafios de recursos, de reagentes a infraestrutura e logística, continuam a ser barreiras significativas. Com qualquer coisa além da sofisticação técnica de um ensaio Cepheid Xpert, a padronização do protocolo é difícil em diferentes ambientes. Portanto, a extração de DNA MTB, conforme detalhado neste trabalho aqui, é um excelente exemplo disso.

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