Name: Um método simples e eficiente para testar agentes imunomoduladores para geração de células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos CD14+ humanos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Aprenda a gerar células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos CD14+ humanos usando agentes imunomoduladores. Este método valida a funcionalidade celular na indução de células T reguladoras para terapias autoimunes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Banchereau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annu Rev Immunol. 18 (1), 767-811 (2000).</li>
<li>Blander, J. M., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-dependent+selection+of+microbial+antigens+for+presentation+by+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Toll-dependent selection of microbial antigens for presentation by dendritic cells.</a> Nature. 440 (7085), 808-812 (2006).</li>
<li>Anderson, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LPS+activation+is+required+for+migratory+activity+and+antigen+presentation+by+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Bio%22%5BJournal%5D)">LPS activation is required for migratory activity and antigen presentation by tolerogenic dendritic cells.</a> J Leukoc Bio. 85 (2), 243-250 (2009).</li>
<li>Iberg, C. A., Hawiger, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+and+induced+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Natural and induced tolerogenic dendritic cells.</a> J Immunol. 204 (4), 733-744 (2020).</li>
<li>Ness, S., Lin, S., Gordon, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+dendritic+cells%2C+T+cell+tolerance%2C+and+dendritic+cell+therapy+for+immunologic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory dendritic cells, T cell tolerance, and dendritic cell therapy for immunologic disease.</a> Front Immunol. 12, 633436(2021).</li>
<li>Ali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sources+of+type+I+interferons+in+infectious+immunity%3A+Plasmacytoid+dendritic+cells+not+always+in+the+driver%27s+seat%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Sources of type I interferons in infectious immunity: Plasmacytoid dendritic cells not always in the driver's seat.</a> Front Immunol. 10, 778(2019).</li>
<li>Fossum, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+antigens+to+different+receptors+on+conventional+type+1+dendritic+cells+impacts+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Targeting antigens to different receptors on conventional type 1 dendritic cells impacts the immune response.</a> J Immunol. 205 (3), 661-673 (2020).</li>
<li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+dendritic+cells+acquire+and+present+lymphatic+endothelial+cell-archived+antigens+during+lymph+node+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Migratory dendritic cells acquire and present lymphatic endothelial cell-archived antigens during lymph node contraction.</a> Nat Comm. 8 (1), 2034(2017).</li>
<li>Chow, K. V., Sutherland, R. M., Zhan, Y., Lew, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity%2C+functional+specialization+and+differentiation+of+monocyte-derived+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity, functional specialization and differentiation of monocyte-derived dendritic cells.</a> Immun Cell Biol. 95 (3), 244-251 (2017).</li>
<li>Johnson, R. K., Overlee, B. L., Sagen, J. A., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+blood+mononuclear+cell+phenotype+and+function+are+maintained+after+overnight+shipping+of+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Peripheral blood mononuclear cell phenotype and function are maintained after overnight shipping of whole blood.</a> Sci Rep. 12 (1), 19920(2022).</li>
<li>Boks, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-10-generated+tolerogenic+dendritic+cells+are+optimal+for+functional+regulatory+T+cell+induction+-+A+comparative+study+of+human+clinical-applicable+DC%5BTitle%5D)+AND+%22Clinl+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-10-generated tolerogenic dendritic cells are optimal for functional regulatory T cell induction - A comparative study of human clinical-applicable DC.</a> Clinl Immunol. 142 (3), 332-342 (2012).</li>
<li>Navarro-Barriuso, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D3-induced+tolerogenic+dendritic+cells+modulate+the+transcriptomic+profile+of+T+CD4%2B+cells+towards+a+functional+hyporesponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Vitamin D3-induced tolerogenic dendritic cells modulate the transcriptomic profile of T CD4+ cells towards a functional hyporesponsiveness.</a> Front Immunol. 11, 599623(2021).</li>
<li>Moorman, C. D., Sohn, S. J., Phee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+therapeutics+for+immune+tolerance%3A+Tolerogenic+vaccines+T+cell+therapy%2C+and+IL-2+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Emerging therapeutics for immune tolerance: Tolerogenic vaccines T cell therapy, and IL-2 therapy.</a> Front Immunol. 12, 657768(2021).</li>
<li>Kenison, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerogenic+nanoparticles+suppress+central+nervous+system+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Tolerogenic nanoparticles suppress central nervous system inflammation.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 117 (50), 32017-32028 (2020).</li>
<li>Neshat, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+islet+engrafts+via+Treg+induction+using+immunomodulating+polymeric+tolerogenic+microparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomater+Sci+Eng%22%5BJournal%5D)">Improvement of islet engrafts via Treg induction using immunomodulating polymeric tolerogenic microparticles.</a> ACS Biomater Sci Eng. 9 (6), 3522-3534 (2023).</li>
<li>Deak, P., Knight, R., Esser-Kahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+tolerogenic+dendritic+cells+via+push%2Fpull+pairing+of+toll-like-receptor+agonists+and+immunomodulators+reduces+EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Robust tolerogenic dendritic cells via push/pull pairing of toll-like-receptor agonists and immunomodulators reduces EAE.</a> Biomaterials. 286, 121571(2022).</li>
<li>Møller, S. H., Wang, L., Ho, P. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+programming+in+dendritic+cells+tailors+immune+responses+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunoly%22%5BJournal%5D)">Metabolic programming in dendritic cells tailors immune responses and homeostasis.</a> Cell Mol Immunoly. 19 (3), 370-383 (2022).</li>
<li>Adamik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+metabolic+states+guide+maturation+of+inflammatory+and+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Distinct metabolic states guide maturation of inflammatory and tolerogenic dendritic cells.</a> Nat Comm. 13 (1), 5184(2022).</li>
<li>Hals, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+optimal+%CE%B2-cell-preserving+treatment+in+latent+autoimmune+diabetes+in+adults%3A+Results+from+a+21-month+randomized+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Obes+Metab%22%5BJournal%5D)">Investigating optimal β-cell-preserving treatment in latent autoimmune diabetes in adults: Results from a 21-month randomized trial.</a> Diabetes Obes Metab. 21 (10), 2219-2227 (2019).</li>
<li>Gammon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+lymph+node+environment+promotes+antigen-specific+efficacy+in+type+1+diabetes+and+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Engineering the lymph node environment promotes antigen-specific efficacy in type 1 diabetes and islet transplantation.</a> Nat Comm. 14 (1), 681(2023).</li>
<li>Sim, W. J., Malinarich, F., Fairhurst, A. -M., Connolly, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+immature%2C+mature+and+tolerogenic+dendritic+cells+with+differing+metabolic+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of immature, mature and tolerogenic dendritic cells with differing metabolic phenotypes.</a> J Vis Exp. (112), e54128(2016).</li>
<li>Jia, S., Kim, J., Esser-Kahn, A. P., Deak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+identification+of+novel+immunomodulatory+combinations+for+the+generation+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening identification of novel immunomodulatory combinations for the generation of tolerogenic dendritic cells.</a> Front Med. 10, 1298424(2024).</li>
<li>Dinh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cryopreservation+of+highly+viable+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+from+whole+blood%3A+A+guide+for+beginners%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and cryopreservation of highly viable human peripheral blood mononuclear cells from whole blood: A guide for beginners.</a> J Vis Exp. (212), e66794(2024).</li>
<li>Akkaya, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+mediate+specific+suppression+by+depleting+peptide-MHC+class+II+from+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells mediate specific suppression by depleting peptide-MHC class II from dendritic cells.</a> Nat Immunol. 20 (2), 218-231 (2019).</li>
<li>Stallone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR+inhibitors+effects+on+regulatory+T+cells+and+on+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">mTOR inhibitors effects on regulatory T cells and on dendritic cells.</a> J Trans Med. 14 (1), 152(2016).</li>
<li>Dahlqvist, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+effect+of+rapamycin+and+tacrolimus+on+monocyte-derived+dendritic+cells+phenotype+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Modulatory effect of rapamycin and tacrolimus on monocyte-derived dendritic cells phenotype and function.</a> Immunobiology. 226 (1), 152031(2021).</li>
<li>Cimen Bozkus, C., Blazquez, A. B., Enokida, T., Bhardwaj, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+T-cell-based+immunogenicity+protocol+for+evaluating+human+antigen-specific+responses%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A T-cell-based immunogenicity protocol for evaluating human antigen-specific responses.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100758(2021).</li>
<li>Nakayama, M., Michels, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+antigen+specificity+of+human+islet+infiltrating+T+cells+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Determining antigen specificity of human islet infiltrating T cells in type 1 diabetes.</a> Front Immunol. 10, 365(2019).</li>
<li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+type+1+T+regulatory+cells+%28Tr1%29+by+tolerogenic+DC-10+requires+the+IL-10-dependent+ILT4%2FHLA-G+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differentiation of type 1 T regulatory cells (Tr1) by tolerogenic DC-10 requires the IL-10-dependent ILT4/HLA-G pathway.</a> Blood. 116 (6), 935-944 (2010).</li>
<li>Taner, T., Hackstein, H., Wang, Z., Morelli, A. E., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin-treated%2C+alloantigen-pulsed+host+dendritic+cells+induce+Ag-specific+T+cell+regulation+and+prolong+graft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transpl%22%5BJournal%5D)">Rapamycin-treated, alloantigen-pulsed host dendritic cells induce Ag-specific T cell regulation and prolong graft survival.</a> Am J Transpl. 5 (2), 228-236 (2005).</li>
<li>Baroja-Mazo, A., Revilla-Nuin, B., Ramírez, P., Pons, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+potency+of+mechanistic+target+of+rapamycin+inhibitors+in+solid-organ+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive potency of mechanistic target of rapamycin inhibitors in solid-organ transplantation.</a> World J Transplant. 6 (1), 183-192 (2016).</li>
<li>Phillips, B. E., Garciafigueroa, Y., Trucco, M., Giannoukakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+tolerogenic+dendritic+cells%3A+Exploring+therapeutic+impact+on+human+autoimmune+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Clinical tolerogenic dendritic cells: Exploring therapeutic impact on human autoimmune disease.</a> Front Immunol. 8, 1279(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1-10 &micro; L Pontas de pipeta filtradas</td><td>VWR</td><td>76322-158</td><td>Tubo de</td></tr><tr><td>centrífuga de 1,5 mL</td> para cultura celular <td>geral VWR</td><td>77508-358</td><td>Pipetas</td></tr><tr><td>serológicas de 10 mL</td> para cultura celular <td>geral VWR</td><td>414004-267</td><td>Cultura celular geral</td></tr><tr><td>100-1000 &micro; L Pontas de pipeta filtradas</td><td>VWR</td><td>76322-164</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de 15 mL</td> para cultura celular geral <td>VWR</td><td>77508-212</td><td>Cultura celular geral</td></tr><tr><td>20-200 &micro; L Pontas de pipeta filtradas</td><td>VWR</td><td>76322-160</td><td>Cultura de células gerais</td></tr><tr><td>2-mercaptoetanol</td><td>MP Biomedical</td><td>194834</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>Tubo cónico de 50 mL</td><td>VWR</td><td>21008-736</td><td>Cultura de células geral</td></tr><tr><td>60 x 15 mm Prato, Nunclon Delta</td><td>Thermo Fischer</td><td>150326</td><td>Cultura de células geral</td></tr><tr><td>96 Placa inferior cónica (V) de poços, superfície não tratada</td><td>Thermo Fischer</td><td>277143</td><td>Cultura de Células Gerais</td></tr><tr><td>96 poços Placa de Fundo Plano</td><td>Thermo Fischer</td><td>161093</td><td>Cultura de Células Geral</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-humano CD272 (BTLA) Anticorpo</td><td>Biolegend</td><td>344518</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>Attune NxT (Laser Vermelho/Azul, 7 Canais)</td><td>Thermo Fischer</td><td>A24863</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Thermo Fischer</td><td>15260-037</td><td>General Cell Anticorpo</td></tr><tr><td>monoclonal de cultura CD14 (61D3), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-0149-42</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>CD1c Anticorpo monoclonal (L161), PE-Cyanine7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0015-42</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>CD209 (DC-SIGN) Anticorpo monoclonal (eB-h209), PerCP-Cyanine5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>45-2099-42</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>CD25 Anticorpo monoclonal (CD25-4E3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0257-42</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>CD274 (PD-L1, B7-H1) Anticorpo Monoclonal (MIH1), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-5983-42</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>CD4 Anticorpo Monoclonal (RPA-T4), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>53-0049-42</td><td>Citometria</td></tr><tr><td>de Fluxo CD40 Anticorpo Monoclonal (5C3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0409-42</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>CD40 Anticorpo Monoclonal (5C3), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>47-0409-42</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>CD69 Anticorpo Monoclonal (FN50), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>MA1-10276</td><td>Citometria</td></tr><tr><td>de Fluxo CD86 Anticorpo Monoclonal (BU63), FITC</td><td>Thermo Fischer</td><td>MHCD8601</td><td>Citometria</td></tr> de <tr><td>Fluxo CD8a Anticorpo Monoclonal (RPA-T8), PE-Cyanine7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0088-42</td><td>Citometria</td></tr> <tr><td>de FluxoFundo cônico (poço em V) Placa de 96 poços</td> Frascos criogênicos de <td>citometria de fluxo</td><td>Thermo Fischer</td><td>2605</td></tr>, Dimetilsulfóxido de cultura <tr><td>de</td><td>células T</td><td>Thermo Fischer</td><td>430488 de 2</td></tr><tr><td>mL (DMSO), grau de sequenciamento</td><td>Thermo Fischer</td><td>20688</td><td>Cultura de células gerais</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14200166</td><td>Cultura de células gerais</td></tr><tr><td>EasySep Kit</td> <td>de isolamento de monócitos humanosStem Cell Technologies</td><td>19359</td><td>Kit</td></tr> de <tr><td>Isolamento de Células T Humanas EasySep</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>17951</td><td>Separação de Células</td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>18000</td><td>Separação de Células</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fischer</td><td>AIM9260G</td> Tubos de <td></td></tr><tr><td>Poliestireno de Fundo Redondo Falcon de Cultura de Células, 5 mL</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>38025</td><td></td></tr><tr><td>Inibidor de ligação ao receptor Fc de separação celular Anticorpo policlonal</td><td>Thermo Fischer</td><td>14-9161-73</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670701</td><td>Cultura de células geral</td></tr><tr><td>Corante de viabilidade fixável eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>65-0865-18</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Foxp3 / Conjunto de tampão de coloração de fator de transcrição</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-5523-00</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>FOXP3 Anticorpo Monoclonal (PCH101), PE-Cyanine5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>35-4776-42</td><td>Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14170-112</td><td>Cultura de Células Geral</td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal Inativado por Calor</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670801</td><td>Cultura de Células Geral</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15630106</td><td>moDC Cell Anticorpo</td></tr><tr><td>monoclonal HLA-DR de cultura (L243), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>A51009</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Ativador de células T CD3 / CD28 / CD2</td> humanas <td>StemCell Technologies</td><td>10970</td><td>Proteína</td></tr><tr><td>recombinante GM-CSF humana para</td> cultura de células <td>Thermo Fischer</td><td>300-03</td><td>moDC</td></tr><tr><td>Kit ELISA IL-10 humano, Thermo Fischer</td><td></td><td>BMS215-2HS</td> de alta sensibilidade<td>Elisa</td></tr><tr><td>IL-4 Humano, Proteína Recombinante Sem Animais</td><td>Thermo Fischer</td><td>AF-200-04</td><td>moDC Cultura de Células</td></tr><tr><td>PBMC Humano (Recém-Isolado)</td><td>UPenn HIC</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Células TNF alfa ELISA Kit Thermo</td><td>Fischer</td><td>BMS223-4</td><td>ELISA</td></tr><tr><td>Microscópio de Luz (DMi1)</td><td>Lucia</td><td>391240</td> Lipopolissacarídeo <td>de Cultura de Células Geral</td></tr><tr><td>(LPS)</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-eblps</td><td>moDC Cell Culture</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Near-IR Dead Stain Kit</td><td>Thermo Fischer</td><td>L34975</td><td>Flow Cytometry</td></tr><tr><td>MEM Non-Essential Acids Solution (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>11140050</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15140122</td><td>General Cell Culture</td></tr><tr><td>Pipeta Controller</td><td>VWR</td><td>77575-370</td><td>Rapamicina de Cultura de Células em Geral</td></tr><tr><td>, 98+%</td><td>Thermo Fischer</td><td>J62473. MF</td><td>moDC Cell Culture</td></tr><tr><td>RPMI 1640 com Glutamax</td><td>Thermo Fischer</td><td>61870-036</td><td>Tampão de Separação de Cultura de Células Gerais</td></tr><tr><td></td><td>Stem Cell Technologies</td><td>20144</td><td></td></tr><tr><td>Coquetel de Estimulação de Células T de Separação de Células (500x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-4970-93</td><td>Contas</td>de</tr><tr><td>Compensação de Cultura de Células T UltraComp eBead Plus</td><td>Thermo Fischer</td><td>01-3333-41</td><td>Flow </td></tr><tr><td>Conjunto de pipetas variáveis</td> de citometria <td>Fischer Scientific</td><td>05-403-152</td><td>Cultura celular geral</td></tr></tbody></table>

um método simples e eficiente para testar agentes imunomoduladores para geração de células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos cd14+ humanos

A Simple and Efficient Method for Testing Immunomodulatory Agents for Generation of Tolerogenic Dendritic Cells from Human CD14+ Monocytes

Descrevemos um protocolo para PBMCs humanos, isolamos células T CD3+ e monócitos CD14+ usando kits de separação magnética disponíveis comercialmente, diferenciamos monócitos em CD14-, HLA-DR+, CD141+, CD1c+ moDCs usando GM-CSF e IL-4, tratamos por 24 h e co-cultivamos com células T autólogas com estimulação anti-CD3/CD28 por 72 h. Um esquema experimental é mostrado na Figura 1.
Isolamento de...

Um método simples e eficiente para testar agentes imunomoduladores para geração de células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos CD14+ humanos

Tolerogenic dendritic cells (tolDCs) are a subset of dendritic cells (DCs) that are known to influence na&#239;ve T cells toward a regulatory T cell ...

a-simple-efficient-method-for-testing-immunomodulatory-agents-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Apresentação de antígenos em órgãos linfóides secundários pelas células dendríticas é crucial para o início da célula T mediada resposta imune adaptativa. Aqui demonstramos a cultura de medula óssea células dendríticas derivadas de camundongos, ativação e de rotulagem para os dois fótons de imagem.

Geração de Medula Óssea Derivado Células Dendríticas murino para uso em dois fótons de imagem

Este vídeo demonstra a geração de células dendríticas imaturas, maduras e tolerogênicas, ou DCs, a partir de monócitos humanos. A incubação de monócitos com fatores de crescimento e citocinas leva à produção de DCs imaturas. Em resposta a moléculas reguladoras imunológicas, DCs imaturas se diferenciam em DCs tolerogênicas e maduras.

Geração de células dendríticas imaturas, maduras e tolerogênicas a partir de monócitos

Este vídeo demonstra um método de conversão de células dendríticas (DCs) em DCs tolerogênicas (TolDCs) usando um agente farmacológico imunomodulador. Essa conversão é confirmada pela avaliação da função TolDC por meio de seu efeito imunossupressor nas células T CD4+.

Efeito de um agente farmacológico imunomodulador na interação entre células dendríticas e células T CD4+

As células dendríticas imaturas podem ser diferenciadas seletivamente em células dendríticas tolerogênicas ou maduras para regular o equilíbrio entre imunidade e tolerância. Este trabalho apresenta um meio de gerar a partir de células dendríticas derivadas de monócitos imaturos (moDCs), moDCs tolerogênicas in vitro e maduras que diferem em fenótipos metabólicos.

Geração de imatura, madura e tolerogênicas células dendríticas com diferentes fenótipos Metabolic

Este estudo compara dois métodos diferentes de isolamento de monócitos humanos para obtenção de células dendríticas (DCs) in vitro. Os monócitos são selecionados por aderência ou enriquecidos negativamente por separação magnética. O rendimento e a viabilidade de monócitos, juntamente com a viabilidade, proliferação e expressão de marcadores de superfície CD11c/CD14 do MDDC, serão comparados entre os dois métodos.

Caracterização de derivados de monócitos células dendríticas humanas por imagem Citometria de Fluxo: Uma Comparação entre dois protocolos de isolamento de monócitos

Aqui, demonstramos como os monócitos são isolados por separação de esferas magnéticas de células mononucleares do sangue periférico após centrifugação por gradiente de densidade de sangue anticoagulado humano. Após a incubação por 5 dias, os monócitos humanos são diferenciados em células dendríticas imaturas e estão prontos para procedimentos experimentais em um ambiente não clínico.

Geração de células dendríticas derivadas de monócitos humanos a partir de sangue inteiro

Aqui, apresentamos um protocolo para desenvolver e caracterizar células dendríticas tolerogenic (TolDCs) e avaliar sua utilidade de imunoterapia.

Desenvolvimento e caracterização funcional de células dendríticas Tolerogenic murino

O dispositivo de transimmunização (TI) ou a placa e os protocolos relacionados foram desenvolvidos para replicar as principais características da fotoquimioterapia extracorpórea (ECP), em um ambiente experimental, permitindo a produção de células dendríticas ativadas fisiologicamente, células (DCs) para a imunoterapia do cancro.

Novo protocolo para a geração de células dendríticas imunogênicas fisiológicas

Aqui apresentamos um protocolo para o aumento in vivo da ininvitro-homing indução de células T regulamentares. Neste protocolo, as células dendríticas são projetadas para produzir localmente altas concentrações da vitamina D ativa (1,25-dihidroxivitamina D ou 1,25[OH]2D) e a vitamina A ativa (ácido retinoico ou AR) de novo.

In Vivo Aumento da Indução de CélulaS T Reguladoras de Gut-Homing

A metodologia descreve a geração de células dendríticas derivadas de monócitos bovinos (MoDCs) e sua aplicação na avaliação in vitro de candidatos antigênicos durante o desenvolvimento de potenciais vacinas veterinárias em bovinos.

Determinação da imunogenicidade vacinal utilizando células dendríticas derivadas de monócitos bovinos

Um protocolo único e abrangente para gerar células dendríticas derivadas de monócitos humanos dessialiladas (mo-DCs) a partir de células mononucleares isoladas do sangue periférico (PBMCs) usando um tratamento com sialidase é apresentado. Além disso, são descritos métodos para avaliar a caracterização fenotípica e funcional das mo-DCs e avaliar como o tratamento com sialidase melhora o nível de maturação das mo-DCs.

Geração de Células Dendríticas Derivadas de Monócitos com Fenótipos Sialilados Diferentes

Aprenda a gerar células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos CD14+ humanos usando agentes imunomoduladores. Este método valida a funcionalidade celular na indução de células T reguladoras para terapias autoimunes.

Um método simples e eficiente para testar agentes imunomoduladores para geração de células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos CD14+ humanos (Vídeo) | JoVE Journal

Um método simples e eficiente para testar agentes imunomoduladores para geração de células dendríticas tolerogênicas a partir de monócitos CD14⁺ humanos

Explorar mais vídeos