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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

Caracterização de derivados de monócitos células dendríticas humanas por imagem Citometria de Fluxo: Uma Comparação entre dois protocolos de isolamento de monócitos

Full Text
14,306 Views
08:31 min
October 18, 2016

DOI: 10.3791/54296-v

Gloria Figueroa1, Tiyash Parira1, Alejandra Laverde1, Gianna Casteleiro1, Amal El-Mabhouh2, Madhavan Nair1, Marisela Agudelo1

1Department of Immunology, Herbert Wertheim College of Medicine,Florida International University, 2Millipore Sigma

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Este estudo compara dois métodos diferentes de isolamento de monócitos humanos para obtenção de células dendríticas (DCs) in vitro. Os monócitos são selecionados por aderência ou enriquecidos negativamente por separação magnética. O rendimento e a viabilidade de monócitos, juntamente com a viabilidade, proliferação e expressão de marcadores de superfície CD11c/CD14 do MDDC, serão comparados entre os dois métodos.

O objetivo geral deste estudo é comparar dois métodos diferentes de isolamento de monócitos humanos para geração de células dendríticas in vitro e caracterizar a expressão da superfície celular CT11c, CT14 das populações derivadas de monócitos resultantes por citometria de fluxo por imagem. Esses protocolos de isolamento de monócitos podem contribuir para o desenvolvimento de métodos confiáveis para a purificação de células dendríticas humanas para pesquisa e aplicações clínicas. A principal vantagem desses protocolos é que eles facilitam o isolamento de monócitos humanos e sua diferenciação em células derivadas de monócitos viáveis e funcionais.

Além disso, este é o primeiro estudo a caracterizar a população específica de células dendríticas derivadas de monócitos por citometria de fluxo de imagem de célula única. Este método também pode ser aplicado como uma alternativa para o isolamento de outras células raras com um rendimento adequado para aplicações de pesquisa a jusante. A demonstração visual desses métodos é fundamental, pois pode ser um desafio manusear as amostras de sangue com segurança sem as instruções e experiência adequadas.

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