Name: Quantificação tridimensional do muco intestinal usando imagens de tecido de montagem total (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: Aprenda a quantificar o muco intestinal em 3D usando microscopia multifotônica em tecidos de montagem total de camundongos. Este método revela alterações estruturais e distribucionais do muco em resposta a estímulos.

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<ol><li>Haber, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+survey+of+the+small+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single-cell survey of the small intestinal epithelium.</a> Nature. 551 (7680), 333-339 (2017).</li>
<li>Bergstrom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+colon-derived+O-glycosylated+mucus+encapsulates+and+modulates+the+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Proximal colon-derived O-glycosylated mucus encapsulates and modulates the microbiota.</a> Science. 370 (6515), 467-472 (2020).</li>
<li>Johansson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inner+of+the+two+muc2+mucin-dependent+mucus+layers+in+colon+is+devoid+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The inner of the two muc2 mucin-dependent mucus layers in colon is devoid of bacteria.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (39), 15064-15069 (2008).</li>
<li>Nyström, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intercrypt+subpopulation+of+goblet+cells+is+essential+for+colonic+mucus+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An intercrypt subpopulation of goblet cells is essential for colonic mucus barrier function.</a> Science. 372 (6539), eabb1590(2021).</li>
<li>Van Der Post, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+weakening+of+the+colonic+mucus+barrier+is+an+early+event+in+ulcerative+colitis+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Structural weakening of the colonic mucus barrier is an early event in ulcerative colitis pathogenesis.</a> Gut. 68 (12), 2142-2151 (2019).</li>
<li>Van Der Sluis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muc2-deficient+mice+spontaneously+develop+colitis%2C+indicating+that+muc2+is+critical+for+colonic+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Muc2-deficient mice spontaneously develop colitis, indicating that muc2 is critical for colonic protection.</a> Gastroenterology. 131 (1), 117-129 (2006).</li>
<li>Velcich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+in+mice+genetically+deficient+in+the+mucin+muc2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer in mice genetically deficient in the mucin muc2.</a> Science. 295 (5560), 1726-1729 (2002).</li>
<li>Birchenough, G. M., Nyström, E. E., Johansson, M. E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sentinel+goblet+cell+guards+the+colonic+crypt+by+triggering+NLRP6-dependent+Muc2+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A sentinel goblet cell guards the colonic crypt by triggering NLRP6-dependent Muc2 secretion.</a> Science. 352 (6293), 1535-1542 (2016).</li>
<li>Dolan, B., Ermund, A., Martinez-Abad, B., Johansson, M. E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clearance+of+small+intestinal+crypts+involves+goblet+cell+mucus+secretion+by+intracellular+granule+rupture+and+enterocyte+ion+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Clearance of small intestinal crypts involves goblet cell mucus secretion by intracellular granule rupture and enterocyte ion transport.</a> Sci Signal. 15 (752), eabl5848(2022).</li>
<li>Gustafsson, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+method+for+studying+mucus+formation%2C+properties%2C+and+thickness+in+human+colonic+biopsies+and+mouse+small+and+large+intestinal+explants%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">An ex vivo method for studying mucus formation, properties, and thickness in human colonic biopsies and mouse small and large intestinal explants.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302 (4), G430-G438 (2012).</li>
<li>Sawaed, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotics+damage+the+colonic+mucus+barrier+in+a+microbiota-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Antibiotics damage the colonic mucus barrier in a microbiota-independent manner.</a> Sci Adv. 10 (37), eadp4119(2024).</li>
<li>Bergstrom, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core+1-and+3-derived+o-glycans+collectively+maintain+the+colonic+mucus+barrier+and+protect+against+spontaneous+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Core 1-and 3-derived o-glycans collectively maintain the colonic mucus barrier and protect against spontaneous colitis in mice.</a> Mucosal Immunol. 10 (1), 91-103 (2017).</li>
<li>Cortez, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrovirus+infects+actively+secreting+goblet+cells+and+alters+the+gut+mucus+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Astrovirus infects actively secreting goblet cells and alters the gut mucus barrier.</a> Nat Commun. 11 (1), 2097(2020).</li>
<li>Knoop, K. A., Mcdonald, K. G., Mccrate, S., Mcdole, J. R., Newberry, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+sensing+by+goblet+cells+controls+immune+surveillance+of+luminal+antigens+in+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microbial sensing by goblet cells controls immune surveillance of luminal antigens in the colon.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 198-210 (2015).</li>
<li>Nikitas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcytosis+of+Listeria+monocytogenes+across+the+intestinal+barrier+upon+specific+targeting+of+goblet+cell+accessible+E-cadherin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Transcytosis of Listeria monocytogenes across the intestinal barrier upon specific targeting of goblet cell accessible E-cadherin.</a> J Exp Med. 208 (11), 2263-2277 (2011).</li>
<li>Tsai, Y. H., Disson, O., Bierne, H., Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murinization+of+internalin+extends+its+receptor+repertoire%2C+altering+Listeria+monocytogenes+cell+tropism+and+host+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Murinization of internalin extends its receptor repertoire, altering Listeria monocytogenes cell tropism and host responses.</a> PLoS Pathog. 9 (5), e1003381(2013).</li>
<li>Birchenough, G. M., Johansson, M. E., Gustafsson, J. K., Bergstrom, J. H., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+goblet+cell+mucus+secretion+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">New developments in goblet cell mucus secretion and function.</a> Mucosal Immunol. 8 (4), 712-719 (2015).</li>
<li>Maheras, K. J., Gow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+anesthesia+time+using+2%2C2%2C2-tribromoethanol-chloral+hydrate+with+low+impact+on+mouse+psychoacoustics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Increased anesthesia time using 2,2,2-tribromoethanol-chloral hydrate with low impact on mouse psychoacoustics.</a> J Neurosci Methods. 219 (1), 61-69 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,2,2-tribromoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>2-metil-2-butanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>240486</td><td></td></tr><tr><td>6 cm de prato&nbsp;</td><td>Alpha Plus</td><td>16021-1</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Hispanagar</td><td>A02599</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de carbamoilcolina &ge; 98% (titulação), cristalino</td><td>SIGMA</td><td>SI-C4382-1G</td><td></td></tr><tr><td>Fio de cobre (novo)</td><td>FIO TOP TECH & INDÚSTRIA DE CABOS</td><td>IW00125</td><td>Fio de cobre sem camada isolante</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Shineteh</td><td>ST-M110</td><td></td></tr><tr><td>Gaze, estéril</td><td>GMTH</td><td>Maio-40</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8&nbsp;</td><td>GraphPad Software</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bolsa térmica</td><td>CONFORT</td><td>SY-666</td><td></td></tr><tr><td>IMARIS 10.0.0</td><td>INSTRUMENTOS OXFORD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>BIOVOVAS</td><td>BL0415-1000</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GENESTAR</td><td>BL0180-1000</td><td></td></tr><tr><td>Sondas de Marcagem de Faloidinas</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Shineteh</td><td>02-1250.18</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>Conjugados da Aglutinina do Germe de Trigo (WGA)</td><td>Biotium</td><td>29027</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss 7MP com objetivo de imersão em água W Plan-Apochromat 20 x/1.0 DIC III (NA 1.0), laser de femtossegundo Spectra-Physics Mai Tai HP ti safira (sem módulo DeepSee) com detectores BP500 nm-550 nm e BP565 nm-610 nm, e comprimento de onda laser de 750 nm</td><td></td><td></td><td>plataforma de imagem usada para adquirir pilhas 3D com uma lente objetiva de alto NA para imagem de tecidos profundos; uma fonte de excitação para microscopia multifóton ajustada para um comprimento de onda de 750 nm</td></tr></tbody></table>

quantificação tridimensional do muco intestinal usando imagens de tecido de montagem total

Three-dimensional Quantification of Intestinal Mucus Using Whole-mount Tissue Imaging

Neste método, quantificamos o volume de muco intestinal a partir de imagens empilhadas de tecidos inteiros adquiridos por microscopia multifotônica. Os tecidos intestinais foram corados com faloidina fluorescente e aglutinina de gérmen de trigo (WGA) para visualização de F-actina celular e muco, respectivamente15,16. Nos tecidos ileal e colônico tratados com PBS, o muco WGA+ foi detectado principalmente dentro das células caliciformes na superfície epi...

Quantificação tridimensional do muco intestinal usando imagens de tecido de montagem total

Mucus plays a critical role in maintaining intestinal homeostasis by facilitating digestion, forming a barrier against microbes, and regulating immune ...

three-dimensional-quantification-intestinal-mucus-using-whole-mount

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

A tecnologia de imagem aprimorada está permitindo imagens tridimensionais de órgãos durante o desenvolvimento. Aqui descrevemos todo um sistema de cultura de órgãos que permite imagens ao vivo das vilosidades em desenvolvimento no intestino fetal de camundongo.

Rato Fetal Whole Intestino Sistema de Cultura para Ex Vivo Manipulação de vias de sinalização e tridimensional Imagens ao vivo de Desenvolvimento Villus

A identificação precisa e localização de células epiteliais ao longo da mucosa intestinal são essenciais para definir diferentes linhagens celulares. imagiologia adequado dos tecidos intestinais é crucial para a identificação de padrões de expressão de proteínas com uma resolução máxima. Este estudo visa delinear os métodos ótimos e as condições de processamento do mouse tecidos intestinais.

Técnica Swiss-rolamento melhorado para preparo intestinal tecido por imuno-histoquímica e análises de imunofluorescência

Sondas de destino-específicos representam uma ferramenta inovadora para a análise de mecanismos moleculares, tais como a expressão da proteína em vários tipos de doença (por exemplo, inflamação, infecção e tumorigênese). Neste estudo, descrevemos uma avaliação tomográfica tridimensional quantitativa da infiltração de macrófagos intestinal em um modelo murino de colite usando tomografia computadorizada mediada por fluorescência de F4/80-específicos.

Tomografia computadorizada mediada por fluorescência para a detecção e quantificação de inflamação Intestinal murino macrófago-relacionados

Nós descrevemos um método para visualizar o IELS do ltγδ GFP-etiquetado usando a imagem latente intravital do intestino pequeno murino pela microscopia confocal invertida do disco de giro. Esta técnica permite o rastreamento de células ao vivo dentro da mucosa para até 4 h e pode ser usada para investigar uma variedade de interações imunológicas intestinais.

Imagem latente intravital de linfócitos intraepithelial no intestino pequeno murine

Aproveitando a microscopia intravital, o método aqui apresentado permite a visualização em tempo real do derramamento de células epiteliais intestinais em animais vivos. Portanto, a mucosa intestinal topicamente manchada (acriflavina e rhodamineB-dextran) de camundongos anesthetizados é imageda até a resolução unicelular usando microscopia confocal.

Uma abordagem baseada em microscopia intravital para avaliar a permeabilidade intestinal e o desempenho do derramamento de células epiteliais

Este protocolo simplificado detalha um fluxo de trabalho para detectar e imaginar bactérias em amostras complexas de tecido, desde a fixação do tecido até micróbios de coloração com hibridização fluorescente in situ .

Visualização de Interações de Microbiota intestinal via Fluorescência In Situ Hibridização, Mancha de Lectina e Imagem

Para estudar como o intestino delgado lida com partículas de tamanhos variados, modificamos um método estabelecido in vivo para determinar o trânsito do intestino delgado.

Estudando o Mecananosense do Intestino Delgado Urinário de Partículas Luminais

Aqui descrevemos a construção de um sistema básico de linhagem celular intestinal tridimensional (3D) e um protocolo de inclusão em parafina para avaliação microscópica de luz de equivalentes intestinais fixos. A coloração de proteínas selecionadas permite a análise de múltiplos parâmetros visuais de um único experimento para uso potencial em estudos pré-clínicos de triagem de drogas.

Sistema Modelo Intestinal Tridimensional Básico (3D) com um Componente Imunológico

Aqui, descrevemos um procedimento que permite a detecção de bactérias patogênicas em todo o órgão durante a infecção e a quantificação das atividades do repórter fluorescente.

Tomografia tridimensional de órgãos inteiros de alta resolução de infecções microbianas

Este artigo descreve um protocolo de imunofluorescência multiplex otimizado para caracterizar a arquitetura tridimensional de metástases peritoneais.

Imagens tridimensionais de tecido portador de tumor usando o clareamento iterativo estende a abordagem de multiplexidade

Aprenda a quantificar o muco intestinal em 3D usando microscopia multifotônica em tecidos de montagem total de camundongos. Este método revela alterações estruturais e distribucionais do muco em resposta a estímulos.

Quantificação tridimensional do muco intestinal usando imagens de tecido de montagem total

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