Name: Contraste de fase e de interferência diferencial Contrast Microscopy (DIC) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprenda a usar microscopia de contraste de fase e DIC para visualizar espécimes biológicos transparentes. Este protocolo demonstra a configuração óptica e as vantagens dessas técnicas essenciais em pesquisa biomédica.

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Vários clips de vídeo demonstrando contraste de fase e microscopia DIC foram tiradas de um outro vídeo-artigo, intitulado <a href="details.stp?ID=197">Camadas de simbiose</a> . JOVE graciosamente reconhece esta contribuição feita pelo laboratório Leadbetter.

O protocolo de texto completo para essa abordagem experimental está disponível em <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">protocolos atuais em biologia celular.</a>

Os autores não têm nada a declarar.

contraste de fase e de interferência diferencial contrast microscopy (dic)

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Microscopia de contraste de fase é muitas vezes usado para produzir contraste para transparente, não de absorção de luz, as amostras biológicas. A técnica foi descoberta por Zernike, em 1942, que recebeu o prêmio Nobel por suas realizações. Microscopia DIC, introduzido no final dos anos 1960, tem sido popular na pesquisa biomédica, porque enfatiza bordas do espécime detalhes estruturais, proporciona alta resolução secções ópticas de amostras de espessura, incluindo as células dos tecidos, ovos e embriões e não sofrem com o halos fase típica de contraste de fase imagens. Este protocolo destaca os princípios e aplicações práticas dessas técnicas de microscopia.

Este protocolo destaca os princípios e aplicações práticas de fase e contraste de interferência diferencial (DIC) Microscopia

Contraste de fase e de interferência diferencial Contrast Microscopy (DIC)

A microscopia de contraste de fase é frequentemente utilizada para produzir contraste em espécimes biológicos transparentes e que não absorvem luz. A técnica foi descoberta por ...

A microscopia óptica é uma das ferramentas, senão a mais importante, no campo da pesquisa biomédica. Dependendo da sua aplicação, diferentes modos de iluminação são desejáveis para a visualização de espécimes. Este vídeo demonstrará dois modos ópticos de iluminação com luz transmitida: contraste de fase e microscopia DIC, ou contraste de interferência diferencial.Olá, sou Victoria San Frolic da instalação central de Imagem Óptica do Centro de Ciências da Saúde da Universidade do Texas em San Antonio. Hoje vou mostrar como visualizar corretamente espécimes utilizando microscopia de contraste de fase e contraste de interferência diferencial. Então, vamos começar.A microscopia padrão em contraste de fase não é adequada para visualizar espécimes transparentes e incolores. A microscopia de contraste de fase é frequentemente utilizada para gerar contraste em espécimes biológicos transparentes e não absorventes de luz. A técnica foi descoberta por Zurich em 1942, que recebeu o Prêmio Nobel por sua conquista.O microscópio de contraste de fase é um microscópio óptico de campo claro com a adição de objetivas especiais de contraste de fase, que contêm uma placa ou anel de fase, e um anel condensador em vez de um diafragma. O anel geralmente está localizado na torreta do condensador e seu tamanho precisa ser selecionado de acordo com as diferentes objetivas. Após configurar a iluminação de Köhler, escolha a objetiva de fase adequada e, em seguida, gire o anel de fase apropriado para a posição correta no condensador.Uma vez que o anel de fase do objetivo e o anel do condensador tenham sido corretamente alinhados para serem concêntricos e sobrepostos, podemos visualizar o espécime e ajustar adequadamente o foco. Vamos então demonstrar como é o contraste de fase ao microscópio. Aqui temos uma imagem de um corte de fígado de rato.Em contraste de fase. Este método realça a aparência do material biológico ao alterar o contraste de diferentes tons de cinza para tons que variam de preto a branco. No entanto, você notará que os espécimes são cercados por um halo, o que obscurece estruturas finas.Esse halo é um artefato causado pela iluminação pelo anel de fase. Agora você notará que, ao mudarmos para campo claro, este espécime é muito difícil de visualizar. Ao voltarmos ao contraste de fase, podemos ver claramente a estrutura e a forma das células no tecido hepático de rato desde sua introdução no final da década de 1960.A microscopia de contraste de interferência diferencial ou DIC tornou-se popular na pesquisa biomédica porque produz imagens de alta resolução de estruturas finas ao realçar as interfaces com contraste, gerando uma imagem de uma seção óptica muito fina. De fato, a capacidade do DIC de produzir seções ópticas tornou-o um modo útil de iluminação em luz transmitida para microscopia confocal. O microscópio DIC é um microscópio de campo claro com a adição dos seguintes elementos: um polarizador entre a fonte de luz e o condensador.Um prisma divisor de feixe DIC no condensador, um prisma combinador de feixe DIC logo atrás da objetiva e um analisador no espaço de infinito antes dos dois feixes. Para obter o melhor desempenho da óptica DIC, é importante primeiro alinhar o microscópio de luz para iluminação de Köhler e, em seguida, posicionar os elementos DIC no trajeto óptico. A luz proveniente da fonte passa por um polarizador e é então dividida pelo primeiro prisma.Esses feixes emparelhados viajam próximos uns dos outros. Se o par passar pelo mesmo material no espécime, ao ser recombinado pelo segundo prisma, eles não interferem entre si e, portanto, aparecem cinzas. No entanto, em uma borda de uma estrutura, um dos feixes do par passa por um material diferente do seu parceiro e é alterado.Quando esses feixes são recombinados pelo segundo prisma, eles interferirão de forma construtiva, produzindo um ponto brilhante, ou destrutivamente, produzindo um ponto escuro. Veja a seguir uma imagem de diatomáceas com contraste DIC. Você notará que os detalhes finos da estrutura das diatomáceas são facilmente visíveis.No entanto, se a óptica DIC for removida, esses detalhes desaparecem. O contraste ao longo do espécime é claro em um lado e mais escuro no outro. Isso dá a impressão de topografia, mas, na verdade, trata-se de uma ilusão.A direção do efeito de sombra projetada pode ser invertida girando o polarizador através de um ponto de cruzamento até o contraste oposto. Acabamos de revisar os modos ópticos de contraste de fase e DIC. Apenas para lembrá-lo, a eliminação de contraste de fase realça os espécimes contrastados de pretos a brancos e é útil para visualizar espécimes que são incolores e transparentes.A IC também gera contraste na amostra. Isso é feito criando uma imagem de alta resolução de uma seção óptica fina. É isso aí.Obrigado por assistir e boa sorte com sua microscopia.

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Biologia

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Aprenda a usar microscopia de contraste de fase e DIC para visualizar espécimes biológicos transparentes. Este protocolo demonstra a configuração óptica e as vantagens dessas técnicas essenciais em pesquisa biomédica.

Contraste de fase e de interferência diferencial Contrast Microscopy (DIC)

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