Крепление агара: основной метод монтирования живых эмбрионов данио-рерио для долгосрочной визуализации

- Начните с добавления агарозы E3 со средней и низкой температурой плавления и нагревания до полного растворения агарозы. Охладите агарозу до 37 градусов Цельсия и добавьте раствор трикаина. Затем обезболите эмбрионы, добавив трикаин в чашку Петри, содержащую эмбрионы в среде Е3. Перемешайте чашку Петри, чтобы собрать эмбрионы в середине.

С помощью пипетки для переноса наберите один эмбрион с минимальным количеством среды. Держите пипетку в вертикальном положении и подбрасывайте эмбрион, чтобы расположить его на кончике пипетки. Теперь поместите эмбрион в раствор агарозы, не добавляя лишнюю среду, которая разбавит агарозу и предотвратит гелеобразование. Аккуратно перемешайте зародыш внутри агарозы и перенесите раствор в лунку рентгенографической пластины с помощью пипетки.

Поместите планшет под микроскоп и с помощью наконечника пипетки расположите эмбрион в нужной ориентации. Как только агароза застынет, налейте на нее среду E3, содержащую трикаин, чтобы агар оставался гидратированным, и сфотографируйте эмбрион. В качестве примера протокола мы установим парабиотические эмбрионы данио-рерио для визуализации и анализа.

Чтобы получить изображения сросшихся эмбрионов, приготовьте агаро