Крепление агара: основной метод монтирования живых эмбрионов данио-рерио для долгосрочной визуализации

0 views • 3:34 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Начните с добавления агарозы E3 со средней и низкой температурой плавления и нагревания до полного растворения агарозы. Охладите агарозу до 37 градусов Цельсия и добавьте раствор трикаина. Затем обезболите эмбрионы, добавив трикаин в чашку Петри, содержащую эмбрионы в среде Е3. Перемешайте чашку Петри, чтобы собрать эмбрионы в середине.

С помощью пипетки для переноса наберите один эмбрион с минимальным количеством среды. Держите пипетку в вертикальном положении и подбрасывайте эмбрион, чтобы расположить его на кончике пипетки. Теперь поместите эмбрион в раствор агарозы, не добавляя лишнюю среду, которая разбавит агарозу и предотвратит гелеобразование. Аккуратно перемешайте зародыш внутри агарозы и перенесите раствор в лунку рентгенографической пластины с помощью пипетки.

Поместите планшет под микроскоп и с помощью наконечника пипетки расположите эмбрион в нужной ориентации. Как только агароза застынет, налейте на нее среду E3, содержащую трикаин, чтобы агар оставался гидратированным, и сфотографируйте эмбрион. В качестве примера протокола мы установим парабиотические эмбрионы данио-рерио для визуализации и анализа.

Чтобы получить изображения сросшихся эмбрионов, приготовьте агарозу с низкой температурой плавления 0,8%. Пока он еще горячий, разложите один миллилитр агарозы в 1,5-миллилитровые микропробирки, установленные в нагревательный блок при температуре 37 градусов Цельсия. Обезболите парабиотические эмбрионы, добавив 1 миллилитр 4 мг на миллилитр рН 7,0 трикаина к 25 мл среды Е3, содержащей эмбрионы. Аккуратно перекрутите блюдо, чтобы эмбрионы скапливались в середине.

Затем с помощью пластиковой пипетки для переноса с широким наконечником наберите эмбрионы в как можно меньшее количество жидкости. Затем переверните пипетку вертикально и аккуратно подпрыгивайте эмбрионы, чтобы они осели на самое дно пипетки. Затем переложите зародыши в 1 миллилитр аликвоты с низкой температурой плавления, слегка коснувшись кончика пипетки на поверхности агарозы. Утилизируйте лишнюю жидкость из пипетки и с помощью пипетки аккуратно перемешайте эмбрионы в агарозе.

Затем с помощью пипетки перенесите агарозу и зародыши в лунку со стеклянным дном шестилуночной пластины. Под стереомикроскопом используйте гелевый наконечник, закрепленный на конце иглы, чтобы расположить эмбрионы близко к покровному стеклу и в желаемой ориентации для визуализации. После того как агароза застыла и в лунки была добавлена среда с трикаином, для получения изображений используется инвертированный широкопольный эпифлуоресцентный лазерный сканирующий конфокальный или конфокальный микроскоп с вращающимся диском.

Для полного поля зрения эмбриона используйте 4-кратное субъективное. Используйте 20-кратный объектив для изображения определенной ткани. Обрабатывайте изображения в соответствии с текстовым протоколом.

10:45

Неинвазивная визуализация диссеминированный кандидоз в Личинки данио рерио

Related Videos

0 Views

10:06

Высокое разрешение Всего горе В Ситу Гибридизация в Эмбрионы рыбок данио изучить экспрессию генов и функции

Related Videos

0 Views

06:48

Живая визуализация хемокиновых рецепторов у нейтрофилов рыбок данио во время раневых реакций

Related Videos

0 Views

07:11

Живая съемка данио рерио Эмбриональные мозга с помощью конфокальной микроскопии

Related Videos

0 Views

09:17

Маркировка и работы с изображениями Ячейки в задний мозг данио рерио

Related Videos

0 Views

04:28

Подготовка образцов методом световой листовой микроскопии: монтаж живых эмбрионов данио-рерио для долгосрочной визуализации

Related Videos

0 Views

03:27

Слоистый монтаж агара: подготовка живых эмбрионов данио-рерио к долговременной визуализации с помощью инвертированного микроскопа

Related Videos

0 Views

05:36

Вскрытие и боковая навеска из эмбрионов данио рерио: Анализ спинномозговой развития шнура

Related Videos

0 Views

07:28

Многослойные Монтаж для долгосрочного Light Sheet микроскопии данио рерио

Related Videos

0 Views

11:19

Визуализация субклеточных структур в эмбрионе данио Living

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026