Подготовка гемолитической культуры Staphylococcus aureus для исследований взаимодействия хозяина и патогена

Начните с селективной агарной пластинки с питательными веществами, дополненной кровью, содержащей эритроциты.

Staphylococcus aureus (S.aureus), грамположительная патогенная бактерия, попадает на агар и инкубируется.

Во время инкубации бактерии используют питательные вещества, растут и формируют колонии.

S. aureus выделяет гемолизин — поровообразующий токсин, который лизирует эритроциты в агаре и образует прозрачные зоны вокруг колоний, что свидетельствует о гемолизе.

Выберите гемолитическую колонию, имокулизируйте её в питательный бульон и инкубируйте в вращающихся условиях для поддержки роста бактерий.

С помощью спектрофотометра измеряйте оптическую плотность (OD) для определения концентрации бактерий.

Исходя из преддозирования, переложите аликвот в свежий питательный бульон, чтобы разбавить клетки, и инкубировать в водяной бане с встряхиванием.

Измеряйте дозу с регулярными интервалами.

ОД около 0,8 означает, что бактерии достигли экспоненциальной фазы роста с однородной физиологией.

Этот гемолитический S. aureus готов к исследованиям взаимодействия хозяина и патогена.

Начните с полосы S. Штаммы Aureus представляют интерес на пластинах кровяных агаров из замороженного глицеролового запаса и инкубации пластин при 37 градусах Цельсия в течение 16–24 часов, чтобы подтвердить их гемолитические фенотипы на основе их способности к лизеризации эритроцитов и формированию прозрачных зон.

Инокулятируйте изоляты одной колонии каждого сорта в 4 миллилитрах триптического соевого бульона (TSB) в стерильных стеклянных трубках и вращайте трубки при 37 градусах Цельсия в течение 16–24 часов в трубочном ролике под углом примерно 70 градусов и 70 оборотов в минуту. На следующее утро измерьте оптическую плотность культур на 600 нанометрах, или_{OD 600}, на спектрофотометре и разведите клетки до_{OD 600} 0,05 в 25 миллилитрах стерильного TSB при соотношении колбы к объёму 5 к 1 в колбах DeLong объемом 125 миллилитров. Инкубировать культуры в водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия со скоростью 280 оборотов в минуту.