Моделирование патогенеза Aeromonas у C. elegans с помощью анализа выживаемости

Начните с культуры штамма Aeromonas , бактериального патогена, выращиваемого в питательной среде.

Измерьте оптическую плотность культуры и регулируйте концентрацию бактерий для обеспечения стабильной инфекционной нагрузки.

Поместить культуру на среду для роста нематод или NGM-агар и инкубировать для формирования однородного бактериального слоя.

Подготовьте синхронизированные с развитием личинки C. elegans — бактериозную нематоду, содержащуюся на обогащённой среде.

Перенесите личинки на бактериальный слой и инкубируете, чтобы позволить прием Aeromonas внутрь и обеспечить колонизацию кишечника.

Внутри хозяина бактерии размножаются и высвобождают цитотоксины, повреждающие эпителиальные клетки кишечника и приводя к смертности.

Перенесите выживших нематод на свежие бактериальные пластины и ежедневно считайте количество живых, мёртвых и нереагирующих червей, пока последний не умрёт.

Наконец, сгенерируйте кривую выживаемости для оценки жизнеспособности хозяина со временем.

Сначала выберите по одной колонии каждого из четырёх штаммов Aeromonas и культивируйте её согласно текстовому протоколу. Затем измерьте поглощение бактериального бульона при_{OD 600} и скорректируйте её, пока всасывание не достигнет 2.0.

Далее распределите 30 микролитров бактериального бульона из каждого сорта на пластины NGM.

Случайным образом выберите и перенесите ранее подготовленных червей L4 на пластины NGM с штаммами Aeromonas. Затем инкубировать пластины при 20 градусах Цельсия до завершения анализа.

Каждый день перемещайте всех живых червей на новую пластину NGM с бактериями. Считайте количество живых, мёртвых и сенсорных червей каждый день, пока последний червь не умрёт.