Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:19 мин. • February 2nd, 2026
Начните с культуры штамма Aeromonas , бактериального патогена, выращиваемого в питательной среде.
Измерьте оптическую плотность культуры и регулируйте концентрацию бактерий для обеспечения стабильной инфекционной нагрузки.
Поместить культуру на среду для роста нематод или NGM-агар и инкубировать для формирования однородного бактериального слоя.
Подготовьте синхронизированные с развитием личинки C. elegans — бактериозную нематоду, содержащуюся на обогащённой среде.
Перенесите личинки на бактериальный слой и инкубируете, чтобы позволить прием Aeromonas внутрь и обеспечить колонизацию кишечника.
Внутри хозяина бактерии размножаются и высвобождают цитотоксины, повреждающие эпителиальные клетки кишечника и приводя к смертности.
Перенесите выживших нематод на свежие бактериальные пластины и ежедневно считайте количество живых, мёртвых и нереагирующих червей, пока последний не умрёт.
Наконец, сгенерируйте кривую выживаемости для оценки жизнеспособности хозяина со временем.
Сначала выберите по одной колонии каждого из четырёх штаммов Aeromonas и культивируйте её согласно текстовому протоколу. Затем измерьте поглощение бактериального бульона приOD 600 и скорректируйте её, пока всасывание не достигнет 2.0.
Далее распределите 30 микролитров бактериального бульона из каждого сорта на пластины NGM.
Случайным образом выберите и перенесите ранее подготовленных червей L4 на пластины NGM с штаммами Aeromonas. Затем инкубировать пластины при 20 градусах Цельсия до завершения анализа.
Каждый день перемещайте всех живых червей на новую пластину NGM с бактериями. Считайте количество живых, мёртвых и сенсорных червей каждый день, пока последний червь не умрёт.