Name: Методы Patch Clamp Емкость записи из Чашечка (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 58 s
Description: Узнайте методы пресинаптической записи patch clamp из чашечки Held у крыс. Этот протокол демонстрирует подготовку мозговой ткани для точных электрофизиологических измерений синаптической передачи.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Установка патча Зажим: Оптика: оптика, очень важно найти хорошие клетки, а также установить положение о нем. Постарайтесь, чтобы получить четкое изображение клеток: острые края, мягкий вид клеток. Сканирование всей области, чтобы искать хорошего MNTB основной клетки с прикрепленными чашечки. Повернуть блюдо искать чашечек с разных ракурсов. Сначала все в порядке, на практике на воздушном шаре формы терминала. Выберите ячейки на поверхности среза, или в два слоя клеток-й. Целевая первые 1 / 3 от ячейки с пипеткой Определение чашечки: Ищите двойной мембраной (см. рисунок 1) и поверните ломтик блюдо, чтобы увидеть его с разных точек зрения, чтобы помочь подтвердить, что это чашечки. <img src="/files/ftp_upload/old/244_2008_8_22_2/244_Figure-01.png" alt="Рисунок 1" width="298" height="159" /> Рисунок 1 Глубина чашечки: Чашечка должна быть на поверхности или как можно ближе к поверхности, как это возможно. Поверхность для исправления: использование тонкой фокусировки ручку на микроскопом, чтобы определить, как &quot;широкий / глубокий&quot; чашечки. Например, ~ 10% от полного включения точной фокусировки даст вам больше чем достаточно, площадь поверхности, чтобы исправить на. Уплотнение на пресинаптических ячейки: Чтобы добраться до ячейки прилагается, обратите внимание на &quot;маленьких&quot; деформации на поверхности клетки, из-за давления поз (~ 0.15psi) в пипетку, использовать манипулятор для запуска пипетку вверх, вниз и поперек, и даже в поверхности терминала presyn, чтобы получить хороший деформации, а затем отпустите давление и применять всасывания, если и по мере необходимости. PULSE, сбор данных программы: Необходимо увеличить размер буфера перед первым использованием, а в случае необходимости путем отбора проб мощности. Необходимо изменение нагрузки макросы каждый раз. Жидкие Junction Потенциал: Presyn Решение Запись-11mV (отрицательный 11mV). Presyn: Cslow = ~ 15 пФ РТС макет для presyn: 10 мкс, 65% (более компенсация может возможно ж / из колебаний) Перед записью емкостью: Тест релаксации тока (10 мВ, 10 мс прыжок), есть ли релаксации monoexponential, то есть, независимо от того presyn срок может быть смоделирована с одного отсека. Фильтры: Установить на 30 кГц и 10 кГц (фильтр Бесселя 1 и 2 соответственно) в процессе релаксации измерения, чтобы убедиться, что быстрая компонента не упустил. Во время мини-записей, Синьшэн использовали 10 кГц и 5 кГц. LGW попросил меня, чтобы использовать только один фильтр установлен на уровне 30 кГц, чтобы убедиться, мы можем измерить время нарастания мини. Файлы именования: 7 цифр 000mmxx, где мм в месяц (или месяц и год) и хх числа клеток. Очистка Решение линий: Линии очищается в конце эксперимента с 20 мл 0,1 М HCl затем по 200 мл ddH2O. Внешние системы переработаны, насос скорость 20-30 оборотов в минуту. (Раствор возвращения из ванны камеры потоки обратно в мерный цилиндр). Настройка 3 отходящих линий для обеспечения достаточного всасывания. Внесите пресинаптических Решение записи: ~ 310 милли осмолярный Presyn Решение должно быть ~ 310 мОсм, чтобы предотвратить R-доступа увеличивается во время эксперимента. Presyn пипетки решение отличается от postsyn пипетки раствор (Presyn имеет АТФ и ГТФ напр.). ТТХ-TEA Решение (изолировать Са токи): <ul><li> Попробуйте применить после уплотнения, или даже изменение кода, на клетки, как чай в растворе блоков К-каналов и деполяризации клетки. Это не хорошо для клетки. По той же причине, она не может быть возможным повторное использование ломтик после TTX применяется. </li><li> Сравните первый и последний ответ клетки, или ломтик, чтобы проверить наличие эффекта длительной деполяризации. </li><li> ТТХ используется на 1 мкм вместо 0,5 мкМ поэтому эффект быстрее. Вам нужно ждать меньше времени после изменения решения. </li></ul> Резка Ломтики Vibratome настройки: <ul><li> 70 Гц поперечных колебаний </li><li> Амплитуда: 1,0 мм </li><li> Скорость движения вперед 0,01-0,02 мм / сек во время резки ломтиками с чашечки, 0,1 противном случае толщина 180 мкм (~ 150мкм в старых животных) </li></ul> Ломтики инкубировать при температуре 37 ° С в течение 1 часа (в том числе сокращая время), то есть оставить в ванне 15-20 минут после резки. Пипетки: Presyn: 3,5-4,5 МОм во-первых, 3,0-3,5 МОм, когда чувствуют себя более уверенно Использование ручной съемник для установки настроек. Использование задержки функция, поскольку стекло толстая (задержки в 200 или 1 работа) Тип стекла: боросиликатное, стандартные стены, нет нити Внешний диаметр: 2,0 мм Внутренний диаметр 1,16 мм Длина: 7,5 см

Методы patch clamp Емкость записи из Чашечка

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Мы демонстрируем основные методы пресинаптических записи зажим патч на чашечке Хелд, млекопитающих центральной нервной терминал нервную систему. Электрические записи из пресинаптических терминала позволяют измерений потенциалов действия, течений кальциевых каналов, пузырьки синтеза (экзоцитоз) и последующего поглощения мембраны (эндоцитоза). Слияние везикулы нейротрансмиттера содержащие причины пузырьков мембраны, которые будут добавлены к клеточной мембране из чашечки. Это увеличение в размере клеточной мембраны измеряется как увеличение емкости. Последующим снижением емкости указывает эндоцитоза, процесс поглощения мембраны или отстранения от мембраны чашечки. Эндоцитоз, это необходимо для поддержания структуры чашечки, и это также необходимо для формирования пузырьков, которые будут заполняться с нейромедиатором для будущих событий экзоцитоза. Емкость записи на чашечке удерживаемые дали возможность прямо и быстро измерять везикулярного выпуска и последующего эндоцитоза в млекопитающих терминал нервов ЦНС. Кроме того, соответствующие постсинаптической активности может быть одновременно измеряется с помощью парных записей. Таким образом полную картину пресинаптические и постсинаптические электрической активности в центральной нервной системе синапса может быть достигнуто с помощью этого препарата. Здесь методы ломтик подготовки, морфологические признаки для идентификации чашечки из Хелд, основной патч зажимной техники, а также примеры емкости записи для измерения экзоцитоз и эндоцитоз представлены.

Методы Patch Clamp Емкость записи из Чашечка

Мы демонстрируем базовые методики проведения локальной фиксации потенциала (патч-кламп) на пресинаптической мембране чашечки Гольда — нервного окончания центральной нервной системы млекопитающих. ...

methods-for-patch-clamp-capacitance-recordings-from-the-calyx

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Это сделано для того, как введение в патч зажим записи с Xenopus laevis ооциты. Она охватывает желточной мембраны удаление, формирование gigaohm уплотнение (gigaseal), и дополнительные преобразования патч для вне-из топологии.

Патч зажим Запись ионных каналов, выраженные в ооцитов Xenopus

Ионный ток BK каналы записываются с использованием методов патч зажим. BK каналов выражаются...

Зажим Patch и перфузии Методы изучения ионных каналов, выраженные в Xenopus Ооцитов

Мы предоставляем шаг за шагом протокол для цельноклеточной патч зажим записи кальция Release-активированный кальций (CRAC) токов в периферической крови мононуклеарных клеток происхождения человека Т-лимфоцитов.

Всего-Cell Запись Кальций Release-активированный кальций (CRAC) Токи в лимфоцитах человека Т

Здесь мы опишем протокол для подготовки агара встраиваемый сетчатки ломтиками, которые подходят для электрофизиологии и Ca 2 + изображения. Этот метод позволяет исследовать ленточного типа синапсов в сетчатке микросхем с использованием прямых патч-зажим записи одного пресинаптических нервных окончаний.

Патч-зажим измерения емкости и Са 2 + Изображений на Одноместный нервных окончаний в сетчатке глаза Ломтики

Этот протокол описывает технику, называемую электрофизиологией зажима целых клеток, которая представляет собой метод изучения электрических свойств нейронов Маутнера и других ретикулоспинальных клеток в эмбрионах рыбок данио.

Электрофизиология цельноклеточного зажима: метод изучения электрических свойств нейронов

Мы разработали неповрежденный мозг спинной подготовку шнур для записи и мониторинга электрической активности с помощью записи зажим патч от нейронов Mauthner и других ретикулоспинальных клеток в эмбрионы рыбок данио. Таким образом, мы можем записать возбуждающих и тормозных синаптических токов, активность канала напряжения закрытого и потенциалы действия от ключевых нейронов в развивающемся эмбрионе.

Патч зажим Recordings от эмбриональных данио рерио Mauthner клеток

Описанный здесь является процедура получения длинные отрезки текущей записи с одного ионного канала с техникой патч-зажим клеток-прилагается. Этот метод позволяет наблюдать в режиме реального времени, картина открытия-закрытия конформации каналов, лежащих в основе биологического сигнала. Эти данные сообщают о свойствах канала в ненарушенных биологических мембран.

Один канал сотового прилагается патч-зажим записи

После экзоцитоза слившаяся плазматическая мембрана восстанавливается с помощью процесса, известного как эндоцитоз. Этот механизм преобразует новые синаптические везикулы для следующего раунда высвобождения. Отдельные эндоцитарные события регистрируются и анализируются с помощью емкостных записей прикрепленных к клеткам надпочечников хромаффинов мышей.

Методы клеточной прилагается измерения емкости в мышь надпочечников хромаффинных Cell

Настоящий протокол описывает эффективный метод получения в режиме реального времени и динамического получения токов калиевого (Kv) канала с напряжением в кардиомиоцитах H9c2 с использованием метода зажима цельноклеточного пластыря.

Зависимая от напряжения регистрация тока калия на кардиомиоцитах H9c2 с помощью метода цельноклеточного пластыря-зажима

Это руководство к изменению формы из стекла микропипетки. В частности, с помощью тепла и давления воздуха конус расширяется без увеличения наконечник открытие, что приводит к снижению сопротивления пипетки. Это очень важно для получения низких записи шума из мелких клеток, но полезно во многих приложениях.

Давление полировки Пипетки для улучшения Патч-зажим Запись

Узнайте методы пресинаптической записи patch clamp из чашечки Held у крыс. Этот протокол демонстрирует подготовку мозговой ткани для точных электрофизиологических измерений синаптической передачи.

Методы Patch Clamp Емкость записи из Чашечка

Больше видео